PE/Cyanine7-Kaninchen-Anti-Human-IFN-gamma monoklonaler Antikörper für intrazelluläre Durchflusszytometrie - P01579

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Interferon-gamma-Funktion und -Lokalisierung

• Interferon gamma (IFN-γ) ist ein Typ-II-Interferon, das hauptsächlich von aktivierten T-Lymphozyten und natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) sezerniert wird und als ein wichtiges pleiotropes Zytokin in der Immunregulation wirkt.
• Es entfaltet entscheidende antimikrobielle, antivirale und antitumorale Reaktionen durch Aktivierung von Effektor-Immunzellen und Verstärkung der Antigenpräsentation.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:16914093
  PMID:8666937
• Nach Bindung an seinen Rezeptor IFNGR1 löst IFN-γ die JAK-STAT-Signalkaskade aus, was zur STAT1-Aktivierung, Kerntranslokation und Transkription von IFN-γ-regulierten Genen führt, einschließlich Transkriptionsfaktoren wie IRF1.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:8349687
  PMID:16914093
• IFN-γ verbessert die Klasse-I-MHC-Antigenpräsentation, indem es den Austausch konstitutiver Proteasom-Untereinheiten gegen Immunoproteasom-Untereinheiten induziert und den PA28-Aktivator hochreguliert, wodurch Menge, Qualität und Repertoire der Peptide für die MHC-Klasse-I-Beladung erhöht werden.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:8666937
  PMID:8163024
  PMID:11112687
• Es reguliert auch MHC-Klasse-II-Komplexe auf der Zelloberfläche hoch, indem es die Expression von Schlüsselmolekülen wie Cathepsinen B, H und L fördert und so die Antigenpräsentation weiter optimiert.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:7729559
• Beteiligt sich an der Regulation der Entwicklung, Ruhe und Differenzierung von hämatopoetischen Stammzellen unter homöostatischen Bedingungen. (Durch Ähnlichkeit)
• IFN-γ ist ein sezerniertes Glykoprotein mit einer berechneten Molekülmasse von etwa 19,3 kDa; es ist durch ein Signalpeptid, Glykosylierung und eine Spaltstelle an einem Paar basischer Reste gekennzeichnet (UniProt Keywords).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für intrazelluläre Durchflusszytometrie geeignete Zellfixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen etablieren, um den Nachweis von IFN-γ in aktivierten T-Zellen oder NK-Zellen zu ermöglichen; gängige Stimulanzien sind PMA/Ionomycin in Gegenwart eines Proteintransportinhibitors.
• Das Immunogen (aa 24–166) entspricht der reifen sezernierten Form von humanem IFN-γ; daher wird erwartet, dass der Antikörper intrazellulär akkumuliertes Zytokin erkennt, was ihn für funktionelle Zytokin-Assays geeignet macht.
• Bei Verwendung des PE/Cyanine7-Konjugats in Mehrfarben-Panels geeignete Kompensationskontrollen einbeziehen und einen Dump-Kanal oder einen Vitalitätsfarbstoff in Betracht ziehen, um tote Zellen auszuschließen.
• Die Färbespezifität in relevanten positiven und negativen Kontrollproben validieren, z. B. stimulierten versus unstimulierten humanen peripheren mononukleären Blutzellen, um den Nachweis von endogenem IFN-γ zu bestätigen.

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