PE-Ratte anti-Maus CD45R/B220 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P06800 / P08575

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von CD45R/B220

• CD45R/B220, codiert durch das Ptprc-Gen, ist ein Rezeptor-Tyrosin-Proteinphosphatase (PTPase), auch bekannt als Leukozyten-Common-Antigen (L-CA) und Lymphozyten-Antigen 5 (Ly-5). Es wird vorwiegend auf hämatopoetischen Zellen exprimiert, einschließlich B- und T-Lymphozyten, und existiert in mehreren Isoformen, die durch alternatives Spleißen entstehen.
• Das Protein fungiert als kritischer Regulator des T-Zell-Rezeptor-Signalings durch Modulation der Aktivität von Src-Familien-Kinasen wie LYN und FYN. Es dephosphoryliert LYN und beeinflusst damit nachgelagerte Signalkaskaden, die für die T-Zell-Aktivierung und Koaktivierung nach Bindung an DPP4 wesentlich sind.
• An immunologischen Synapsen zwischen antigenpräsentierenden Zellen (APZ) und T-Zellen interagiert CD45 mit CLEC10A auf unreifen dendritischen Zellen, welches Tn-Antigen-tragendes CD45 auf Effektor-T-Zellen erkennt. Diese Interaktion hilft, die Schwellenwerte für die T-Zell-Aktivierung feinabzustimmen und autoreaktive Antworten zu begrenzen (Aufgrund von Ähnlichkeit).
• CD45 enthält zwei intrazelluläre Phosphatase-Domänen: Die erste Domäne zeigt katalytische Aktivität, während die zweite Domäne die Substratspezifität zu regulieren scheint. Die extrazelluläre Region ist stark glykosyliert und trägt zu Ligandeninteraktionen und isoformspezifischen Funktionen bei.
• Das Protein lokalisiert sich primär zur Plasmamembran und ist in Membran-Rafts und immunologischen Synapsen angereichert, wo es räumlich Signalkomplexe nach Antigenengagement organisiert.
• Als Transmembran-Glykoprotein und Mitglied der Proteinphosphatase-Familie ist CD45 ein etablierter Marker für Immunzelllinien. Die B220-Isoform ist spezifisch mit B-Zellen assoziiert und wird weitgehend zur Identifizierung von B-Zellpopulationen in Mausmodellen verwendet.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung und Glykosylierung, modulieren die enzymatische Aktivität von CD45 und die Zelloberflächenexpression und beeinflussen damit die Dynamik der Immunzellsignalgebung.
• Obwohl hauptsächlich in lymphoiden Zellen untersucht, spielt CD45 auch Rollen in anderen Leukozyten-Teilmengen und trägt zu integrierten angeborenen und adaptiven Immunantworten bei.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, abgeleitet von einer konservierten Region von Maus/Mensch CD45R/B220. Der resultierende Antikörper wird erwartet, Maus-CD45R/B220 zu erkennen; eine Kreuzreaktivität mit humanen Orthologen sollte bei Bedarf experimentell validiert werden.
• Dieser Antikörper ist an PE (Phycoerythrin) konjugiert, ein hell fluoreszierender Farbstoff, der für multicolore Durchflusszytometrie-Panels geeignet ist. Erwägen Sie eine Titrierung des Antikörpers, um das Signal-zu-Rausch-Verhältnis zu optimieren und unspezifische Bindungen in Ihrem spezifischen Zellsystem zu minimieren.
• Für Anwendungen der Durchflusszytometrie verwenden Sie geeignete Viabilitätsfarbstoffe und Fc-Rezeptor-Blockierungsreagenzien, um die Hintergrundfärbung zu reduzieren. Analysieren Sie frische oder ordnungsgemäß kryokonservierte Maus-Lymphoidgewebe (Milz, Lymphknoten), um B220-positive B-Zellpopulationen zu detektieren.
• Angesichts des berichteten Molekulargewichtsbereichs (130–144 kDa), der alternatives Spleißen und Glykosylierung widerspiegelt, bestätigen Sie Expression und Bandgröße per Western Blot, wenn Sie dieses Produkt für orthogonale Detektionsmethoden anpassen, auch wenn die primär validierte Anwendung die Durchflusszytometrie ist.

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