PE Kaninchen anti-Ratte CD25 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P26897

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD25 (Interleukin-2-Rezeptor-Untereinheit Alpha) Funktion und Lokalisierung

• CD25, auch bekannt als Interleukin-2-Rezeptor-Untereinheit Alpha, IL-2Rα oder TAC-Antigen, ist ein Typ-I-Membranprotein, das beim Menschen durch das Il2ra-Gen codiert wird (UniProt P26897).
• Es dient als Alpha-Untereinheit des hochaffinen Interleukin-2 (IL-2)-Rezeptors. Zusammen mit der Beta- (CD122) und der Gamma-Untereinheit (CD132) bindet es IL-2 und vermittelt die Signalübertragung, die für die Immunhomöostase entscheidend ist.
• Der Rezeptor spielt eine Schlüsselrolle bei der Immuntoleranz, indem er die Aktivität regulatorischer T-Zellen (TREGs) steuert, welche die Aktivierung und Expansion autoreaktiver T-Zellen unterdrücken.
• CD25 wird konstitutiv auf hohem Niveau auf CD4+Foxp3+ regulatorischen T-Zellen exprimiert und transient auf aktivierten Effektor-T-Zellen hochreguliert, was es zu einem wichtigen Marker für immunologische Studien macht.
• Die extrazelluläre Region enthält zwei Sushi (CCP/SCR)-Domänen, die für Komplement-Kontrollproteine charakteristisch sind und an die Ligandenbindung beteiligt sind.
• Wichtige strukturelle Merkmale umfassen ein N-terminales Signalpeptid, mehrere Sushi-Wiederholungen, eine einzelne Transmembranhelix und einen kurzen zytoplasmatischen Schwanz. Das Protein wird durch N-verknüpfte Glykosilierung modifiziert und enthält intraketale Disulfidbrücken.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen für diesen monoklonalen Antikörper umfasst die Aminosäuren 22-235 von Ratten-CD25, was der gesamten extrazellulären Domäne entspricht. Dieses Design zielt auf die native, membranferne Region ab, die in intakten Zellen zugänglich ist.
• Als PE-konjugierter Antikörper ist er primär für die Durchflusszytometrie bestimmt. Wir empfehlen eine anfängliche Titration unter Verwendung eines geeigneten zellulären Modells (z. B. aktivierte Ratten-Milzzellen oder T-Zelllinien), um die optimale Färbekonzentration zu ermitteln.
• Verwenden Sie einen geeigneten Isotyp-Kontrolle, um positive Färbung vom Hintergrund zu unterscheiden. Eine geeignete Blockierung von Fc-Rezeptoren wird empfohlen, wenn Zellen mit hoher FcγR-Expression gefärbt werden.
• Da die CD25-Expression empfindlich auf Fixierung und Permeabilisierung reagieren kann, validieren Sie Ihr Probenvorbereitungsprotokoll, um Oberflächenepitope zu erhalten, wenn Oberflächenmarker bewertet werden.
• Für die intrazelluläre Detektion von CD25 ist die Optimierung der Permeabilisierungsschritte unerlässlich, da sterische Hindernisse die Zugänglichkeit des Antikörpers beeinträchtigen können.

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