PE-Kaninchen anti-Maus TNF-α monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie (intrazellulär) - P06804

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von TNF-α

• Proteinidentität: Tumornekrosefaktor alpha (TNF-α), auch bekannt als Cachektin oder TNFSF2, ist ein stark proinflammatorisches Zytokin.
• Kernfunktion: Bindet an TNFRSF1A/TNFR1 und TNFRSF1B/TNFBR und vermittelt vielfältige zelluläre Reaktionen wie Apoptose, Zellproliferation und Differenzierung.
• Immunologische Rolle: Wird hauptsächlich von Makrophagen sezerniert; wirkt als endogenes Pyrogen, das direkt oder über die Induktion von Interleukin-1 Fieber verursacht, und trägt zur Kachexie bei chronischen Entzündungen bei.
• Stoffwechseleffekte: Induziert Insulinresistenz durch Hemmung der insulininduzierten Tyrosinphosphorylierung von IRS1 und Glukoseaufnahme in Adipozyten, teilweise über den Abbau des GKAP42-Proteins. Verwandte Literatur: PMID:25586176
• Knochenumbau: Fördert die Osteoklastogenese und vermittelt dadurch die Knochenresorption. Verwandte Literatur: PMID:32741026
• Angiogenese: Spielt eine Rolle bei der Angiogenese, indem es synergistisch mit IL-1β und IL-6 die VEGF-Produktion induziert.
• Isoformfunktion: Die Form der intrazellulären Domäne des Tumornekrosefaktors (ICD) induziert die IL-12-Produktion in dendritischen Zellen.
• Subzelluläre Lokalisation: Liegt als membranverankertes Vorläuferprotein (Transmembranprotein Typ II) und nach proteolytischer Spaltung als lösliche sezernierte Form vor.
• Posttranslationelle Modifikationen: Zu den Merkmalen gehören N-verknüpfte Glykosylierung, eine Disulfidbrücke, Lipidierung (Myristoylierung) und Phosphorylierung; diese regulieren den Transport und die Aktivität.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser PE-konjugierte monoklonale Kaninchenantikörper ist für die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC) konzipiert. Um intrazelluläres TNF-α nachzuweisen, ist eine Permeabilisierung der Zellen erforderlich.
• Erwägen Sie die Verwendung des rekombinanten Protein-Immunogens (AS 80-235) als Positivkontrolle oder Blockierungsmittel, um die Spezifität zu bestätigen.
• Da TNF-α größtenteils sezerniert wird, kann eine Stimulation mit LPS oder PMA/Ionomycin in Gegenwart eines Proteintransportinhibitors (z. B. Brefeldin A) die intrazelluläre Färbung in Makrophagen oder T-Zellen verstärken.
• Validieren Sie den Antikörper im relevanten Probensystem (z. B. Mäusesplenozyten oder Makrophagen-Zelllinien) und verwenden Sie geeignete Isotypkontrollen.
• Schützen Sie das PE-Konjugat vor Licht und vermeiden Sie Gefrier-Auftau-Zyklen, um die Fluoreszenzintensität zu erhalten.

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