PE-kaninchen monoklonaler Antikörper gegen Mensch/Affe CD14 für Durchflusszytometrie - P08571

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD14

• CD14, auch bekannt als Monozyten-Differenzierungsantigen, My23-Antigen oder myeloidzellspezifisches leucinreiches Glykoprotein, ist ein Schlüsselspieler der angeborenen Immunität.
• Es wirkt als Korezeptor für bakterielles Lipopolysaccharid (LPS), bindet monomeres LPS gemeinsam mit LBP und übergibt es an den LY96/TLR4-Komplex, wodurch es die angeborene Immunantwort auf bakterielles LPS vermittelt. Zugehörige Referenzen: PMID:1698311 PMID:23264655 PMID:20133493 PMID:22265692
• Die nachgeschaltete Signalübertragung erfolgt über MyD88, TIRAP und TRAF6, was zur NF-kappa-B-Aktivierung, Zytokinsekretion und der Entzündungsantwort führt. Zugehörige Referenzen: PMID:8612135
• CD14 fungiert zudem als Korezeptor für TLR2:TLR6- und TLR2:TLR1-Heterodimere als Antwort auf diacylierte und triacylierte Lipopeptide; diese Cluster lösen Zelloberflächen-Signalisierung und anschließende lipidraft-abhängige Trafizierung zum Golgi-Apparat aus. Zugehörige Referenzen: PMID:16880211
• Darüber hinaus bindet CD14 elektronegatives LDL (LDL(-)) und vermittelt die durch LDL(-) induzierte Zytokinfreisetzung, wodurch angeborene Immunität mit dem Lipidstoffwechsel verknüpft wird. Zugehörige Referenzen: PMID:23880187
• Subzellulär befindet sich CD14 auf der Zellmembran, in Membranrafts und im Golgi-Apparat und kommt auch als sezerniertes Protein vor. Es ist ein Leucin-reiches Repeat (LRR) Glykoprotein mit einem GPI-Anker.
• Gewebespezifität: CD14 wird stark auf der Oberfläche von Monozyten und schwach auf Granulozyten exprimiert; es wird auf Makrophagen und den meisten Gewebemakrophagen nachgewiesen. Zugehörige Referenzen: PMID:1698311

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 20–352) des menschlichen CD14, was darauf hindeutet, dass der Antikörper wahrscheinlich die native Konformation des Rezeptors erkennt. Validieren Sie die Färbung in Ihrem relevanten ProbenSystem unter Verwendung geeigneter Positiv- und Negativkontrollen.
• Für die Durchflusszytometrie titrieren Sie den PE-konjugierten Antikörper, um die optimale Arbeitskonzentration für Ihre interessierende Zellart zu bestimmen. Verwenden Sie eine Isotypkontrolle, um unspezifische Bindung zu bewerten.
• Kreuzreaktivität mit cynomolguischem Affen-CD14 wurde nachgewiesen; bei der Verwendung anderer Spezies überprüfen Sie die Reaktivität unabhängig.
• Vermeiden Sie längere Lichteinwirkung bei der Arbeit mit dem PE-Konjugat, um die Signalintegrität zu erhalten.

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