PE Kaninchen anti-Human RANKL/CD254 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie (Intrazellulär) - O14788

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von RANKL/CD254

• TNFSF11, auch bekannt als RANKL, OPGL, ODF, TRANCE und CD254, ist ein Mitglied der Superfamilie der Tumornekrosefaktor-(TNF)-Liganden (UniProt: O14788).
• Es fungiert als Schlüssel-Zytokin durch Bindung an TNFRSF11A/RANK und TNFRSF11B/OPG und wirkt als Differenzierungs- und Aktivierungsfaktor für Osteoklasten. Verwandte Referenzen: PMID:22664871
• Im Immunsystem verstärkt RANKL die durch dendritische Zellen vermittelte Stimulation der Proliferation naiver T-Zellen und reguliert die Interaktionen zwischen T-Zellen und dendritischen Zellen (By similarity).
• Es induziert die Osteoklastogenese durch Aktivierung von Signalwegen, die zur nukleären Translokation von NFATC1 und Transkription von osteoklastenspezifischen Genen führen; induziert auch die Aktivierung von CREB1 und mitochondriale ROS über die TMEM64-ATP2A2-Achse (By similarity).
• Subzellulär existiert RANKL als Transmembranprotein auf der Zellmembran, kann aber auch abgespalten und sezerniert werden, wobei es im Zytoplasma und in sekretierten Formen nachweisbar ist.
• Die höchste Expression findet sich in peripheren Lymphknoten, mit schwächerer Expression in Milz, peripheren Blutzellen, Knochenmark, Herz, Plazenta, Skelettmuskel, Magen und Schilddrüse.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, und alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, was zu seiner funktionellen Vielfalt beiträgt; Mutationen in TNFSF11 sind mit Osteopetrose assoziiert.
• Schlüsselwörter umfassen Zytokin, Membran, alternatives Spleißen, Entwicklungsprotein, Glykoprotein, Signalanker und Transmembranhelix.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die extrazelluläre Domäne (aa 136-317), die sowohl membrangebundenes als auch lösliches RANKL erkennen kann. Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie sorgen Sie für eine ausreichende Zellpermeabilisierung und ziehen Sie die Einbeziehung unstimulierter Kontrollen in Betracht.
• Als PE-konjugierter Antikörper: Schützen Sie vor Licht und vermeiden Sie wiederholte Gefrier- und Auftauzyklen, um die Fluoreszenzintensität und die Integrität des Antikörpers zu erhalten.
• Validieren Sie die Leistung in relevanten zellulären Modellen wie aktivierten T-Zellen, Osteoklastenvorläufern oder RANKL-exprimierenden Zelllinien. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Färbekonzentration für Ihr spezifisches System zu bestimmen.
• Bei Verwendung in Kombination mit anderen Fluorophoren entwerfen Sie die Kompensationskontrollen sorgfältig, um spektrale Überlappungsartefakte zu vermeiden.

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