PE-Kaninchen anti-Mensch NT5E/CD73 Monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P21589

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NT5E/CD73

• NT5E/CD73, auch bekannt als Ecto-5'-Nukleotidase, ist ein Glykosylphosphatidylinositol (GPI)-verankertes Zellmembranprotein, das die Hydrolyse extrazellulärer Nukleotidmonophosphate zu den entsprechenden Nukleosiden und anorganischem Phosphat katalysiert.
• Das Enzym zeigt eine Präferenz für AMP als Substrat, kann aber auch IMP, UMP, GMP, CMP und Desoxyribonukleotidmonophosphate wie dAMP, dCMP und dTMP hydrolysieren. Zugehörige Referenzen: PMID:21933152, PMID:22997138, PMID:23142347
• NT5E zeigt eine Selektivität für Ribonukleotidmonophosphate gegenüber Desoxyriboseformen. Zugehörige Referenzen: PMID:34403084
• Das Protein ist auf der Zellmembran lokalisiert, wo es die Purinergische Signalgebung reguliert, indem es extrazelluläres AMP zu Adenosin umwandelt, einem stark immunsuppressiven Metaboliten.
• NT5E ist ein Mitglied der 5'-Nukleotidase-Familie und benötigt Zinkionen für seine hydrolytische Aktivität, wie durch Metallbindungsdomänen nachgewiesen wird.
• Alternatives Spleißen des NT5E-Gens erzeugt mehrere Transkriptvarianten, wobei die funktionelle Bedeutung aller Isoformen noch nicht vollständig charakterisiert ist.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-verknüpfte Glykosylierung, Disulfidbindungsbildung und die Zugabe eines GPI-Ankers, der das Enzym an der Zelloberfläche verankert.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Dieser PE-konjugierte monoklonale Antikörper ist für die direkte durchflusszytometrische Detektion von CD73 auf der Oberfläche lebender menschlicher Zellen konzipiert. Stellen Sie sicher, dass die Zellen vital sind, um die Membranintegrität und eine optimale Epitop-Präsentation zu erhalten.
• Das Immunogen entspricht der extrazellulären Domäne (A.A. 27-547), sodass erwartet wird, dass der Antikörper ein Epitop erkennt, das ohne Permeabilisierung auf der Zelloberfläche zugänglich ist.
• Für beste Ergebnisse titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Konzentration für Ihre spezifische Zelltyp- und Färbebedingungen zu ermitteln. Typischerweise ist 0,1–1 µg pro 1×10^6 Zellen ein sinnvoller Startbereich.
• Verwenden Sie geeignete Isotypkontrollen und Kompensationskontrollen bei der Durchführung von mehrfarbiger Durchflusszytometrie, um unspezifische Bindung und spektrale Überlappung zu berücksichtigen.
• Die CD73-Expression kann durch zelluläre Aktivierung moduliert werden; erwägen Sie die Validierung des Antikörpers sowohl in ruhenden als auch in stimulierten Proben, falls dies für Ihre Studie relevant ist.

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