PE-Kaninchen-anti-humaner-CD48-monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie – P09326

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD48

• CD48, auch als SLAMF2 oder BLAST-1 bezeichnet, ist ein glykosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankertes Zelloberflächen-Glykoprotein, das zur Familie der Signaling-Lymphocytic-Activation-Molecule-(SLAM)-Proteine gehört. Es verfügt über eine extrazelluläre Region mit zwei immunglobulinähnlichen Domänen und einen GPI-Anker; alternatives Spleißen führt zur Bildung mehrerer Isoformen.
• CD48 interagiert über seine N-terminale Immunglobulindomäne mit den Zelloberflächenrezeptoren CD244/2B4 oder CD2 und reguliert dadurch die Funktion und Aktivierung von Immunzellen. Verwandte Referenzen: PMID:12007789, PMID:19494291, PMID:27249817
• Es vermittelt die Signalübertragung in T-Zellen, indem es mit CD2 assoziiert und die Src-Familienprotein-Tyrosinkinase LCK sowie LAT effizient zum TCR/CD3-Komplex bringt und dadurch die Phosphorylierung von LCK fördert. Verwandte Referenzen: PMID:12007789, PMID:19494291
• Bei der Bindung an CD244 induziert CD48 die Phosphorylierung der zytoplasmatischen immunrezeptor-tyrosinbasierten Schaltmotive (ITSMs) von CD244 und initiiert Signalereignisse, die zur Bildung immunologischer Synapsen und zur gerichteten Freisetzung zytolytischer Granula durch T-Lymphozyten und NK-Zellen führen. Verwandte Referenzen: PMID:27249817
• CD48 ist auf der Zellmembran und in Membranrafts lokalisiert; außerdem existiert eine sezernierte Form, die wahrscheinlich durch die Abspaltung des GPI-Ankers oder alternatives Spleißen entsteht.
• Es wird auf allen hämatopoetischen Zellen, einschließlich Lymphozyten, Monozyten und dendritischen Zellen, weit verbreitet exprimiert.
• Das Protein enthält konservierte Immunglobulindomänen und Disulfidbrücken und unterliegt posttranslationalen Modifikationen, einschließlich N-glykosylierung und GPI-Verankerung.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Für Anwendungen in der Durchflusszytometrie sollte dieser PE-konjugierte Antikörper titriert werden, um die optimale Färbekonzentration für den jeweiligen Zelltyp und die jeweiligen Versuchsbedingungen zu bestimmen.
• Da CD48 ein GPI-verankertes Oberflächenprotein ist, ist eine Färbung der Zelloberfläche bei lebenden Zellen in der Regel ausreichend; eine Permeabilisierung sollte vermieden werden, sofern nicht ausdrücklich ein intrazellulärer Nachweis erforderlich ist.
• Aufgrund des Designs des Immunogens (extrazelluläre Domäne, Aminosäuren 27–220) wird erwartet, dass der Antikörper die native Konformation von CD48 erkennt; validieren Sie dies im relevanten Probensystem, beispielsweise in mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) oder in hämatopoetischen Zelllinien.
• Es sollte ein geeigneter Fc-Rezeptor-Blockierungsschritt in Betracht gezogen werden, um die unspezifische Bindung zu reduzieren, insbesondere bei der Arbeit mit myeloischen Zellen.
• Angesichts der weit verbreiteten Expression von CD48 auf hämatopoetischen Zellen sollten geeignete Gating-Strategien entwickelt und Isotypkontrollen eingeschlossen werden, um eine spezifische Färbung zu unterscheiden.

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