PAK1 Kaninchen-mAk für WB, IF/ICC, ELISA - Q13153

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PAK1-Funktion und -Lokalisation

• PAK1 (p21-aktivierte Kinase 1), kodiert durch das PAK1-Gen, ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, auch bekannt als alpha-PAK, p65-PAK und PAKalpha. Sie gehört zur PAK-Familie von Kinasen, die als Effektoren für die kleinen GTPasen CDC42 und RAC1 wirken.
• PAK1 fungiert als kritischer Signal-Knotenpunkt stromabwärts von Integrinen und Rezeptor-Tyrosinkinasen und reguliert diverse zelluläre Prozesse wie Zytoskelettdynamik, Zelladhäsion, Migration, Proliferation, Apoptose, Mitose und vesikelvermittelten Transport (PubMed:10551809, PubMed:11896197, PubMed:12876277). Verwandte Referenzen: PMID:10551809 PMID:11896197 PMID:12876277
• Nach Aktivierung durch GTP-gebundenes CDC42 und RAC1 verbindet PAK1 Rho-Familien-GTPasen mit dem JNK-MAP-Kinase-Signalweg und phosphoryliert nachgeschaltete Ziele wie MAP2K1, RAF1 und LIMK1, wodurch die Genexpression und Aktin-Umgestaltung beeinflusst werden (PubMed:8805275, PubMed:9528787, PubMed:11733498, PubMed:23633677). Verwandte Referenzen: PMID:8805275 PMID:9528787 PMID:11733498 PMID:23633677
• PAK1 lokalisiert in mehreren subzellulären Kompartimenten, einschließlich Zytoplasma, Fokalkontakten, Lamellipodien, Membranausstülpungen, Invadopodien, Nukleoplasma und Zentrosomen, was mit ihren pleiotropen Rollen in Zellmotilität, Adhäsion und nukleärer Signalgebung übereinstimmt.
• Die Kinase spielt eine Rolle bei der Reorganisation des Aktinzytoskeletts und der Fokalkontaktkomplexe, indem sie direkt Regulatoren wie Myosin-Leichtkette und Cofilin phosphoryliert, um die Aktomyosin-Kontraktilität und Zellform zu modulieren (PubMed:9032240, PubMed:9395435). Verwandte Referenzen: PMID:9032240 PMID:9395435
• In Neuronen ist PAK1 essentiell für die Bildung dendritischer Dornen, die Entwicklung exzitatorischer Synapsen und die GABAerge inhibitorische Übertragung, teilweise durch F-Aktin-Stabilisierung und Phosphorylierung der regulatorischen Leichtkette von Myosin II.
• PAK1 wurde mit Krebs in Verbindung gebracht: Sie ist in Magenkrebszellen und -geweben überexprimiert (PubMed:25766321), fördert Zellmigration und -invasion und phosphoryliert Substrate, die am Chromatin-Remodeling (MORC2, PubMed:23260667) und dem epithelial-mesenchymalen Übergang (SNAI1, PubMed:15833848) beteiligt sind. Verwandte Referenzen: PMID:25766321 PMID:23260667 PMID:15833848
• Darüber hinaus ist PAK1 an der Insulinsekretion (PubMed:22669945), der DNA-Schadensantwort und der Dynamik von Stressgranula beteiligt (PubMed:20417602). Verwandte Referenzen: PMID:22669945 PMID:20417602

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 1-100 von humanem PAK1 umfasst, was der N-terminalen Region entspricht. Diese Region ist wahrscheinlich bei Human, Maus und Ratte konserviert, was mit der berichteten Kreuzreaktivität übereinstimmt.
• Für Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von PAK1 etwa 61 kDa; posttranslationale Modifikationen oder Splice-Varianten können jedoch zu zusätzlichen Banden führen. Verwenden Sie geeignete reduzierende Bedingungen und validieren Sie mit bekannten Positivkontrollen (z. B. HeLa- oder MCF-7-Zelllysaten).
• In der Immunfluoreszenz (IF/ICC) zeigt PAK1 eine dynamische subzelluläre Verteilung, die je nach Zelltyp und Stimulation in Fokalkontakten, Membranausstülpungen und im Zellkern erscheint. Eine Fixierung mit Paraformaldehyd und Permeabilisierung mit Triton X-100 oder Methanol kann geeignet sein, eine Optimierung für Ihre spezifische Zelllinie und Bedingungen wird jedoch empfohlen.
• Für ELISA kann der Antikörper in direkten oder indirekten Formaten verwendet werden. Erwägen Sie die Verwendung des Immunogen-Peptids als Positivkontrolle, um die Assay-Empfindlichkeit und -Spezifität zu etablieren.
• Dieser Antikörper wurde nicht in anderen Anwendungen getestet; wenn er für IP, ChIP oder funktionelle Blockierung verwendet wird, wird eine gründliche Validierung im relevanten Proben-System empfohlen.

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