NLRP3 Kaninchen-poliklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q96P20

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NLRP3

• NLRP3 (NACHT, LRR und PYD-Domänen enthaltendes Protein 3), auch bekannt als Cryopyrin, CIAS1 oder NALP3, ist ein Mitglied der NOD-ähnlichen Rezeptor (NLR)-Familie. Es zeichnet sich durch eine N-terminale Pyrin-Domäne (PYD), eine zentrale NACHT-Domäne und C-terminale Leucin-reiche Wiederholungen (LRRs) aus.
• Als Sensorkomponente des NLRP3-Inflammasoms steuert es die Rekrutierung von ASC (PYCARD) und Pro-Caspase-1, was zur Aktivierung von Caspase-1 führt. Diese spaltet Pro-IL-1β und Pro-IL-18 zu reifen Zytokinen und löst eine Gasdermin-D-vermittelte Pyroptose aus.
  Verwandte Referenzen: PMID:16407889 PMID:18403674 PMID:18604214 PMID:27432880 PMID:23582325 PMID:28847925 PMID:31189953 PMID:22801494
• NLRP3 reagiert auf ein breites Spektrum an Stimuli, darunter extrazelluläres ATP, Nigericin, Monosodiumurat-Kristalle, Cholesterinkristalle, Amyloid-β-Fibrillen und Umweltpartikel. Diese Signale induzieren einen Kaliumausstrom und Membranstörungen, was zur Translokation von NLRP3 zum Mikrotubulus-Organisationszentrum (MTOC) und zum dispersen trans-Golgi-Netzwerk (dTGN) führt. Dort bindet es über seine polybasische Region an Phosphatidylinositol-4-Phosphat (PtdIns4P), was die Assemblierung des Inflammasoms erleichtert.
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• Wird hauptsächlich in Makrophagen exprimiert und auch in dendritischen Zellen, B- und T-Zellen, Granulozyten, Lungenepithelzellen, Chondrozyten und geschichteten Plattenepithelien (oral, ösophageal, zervikal und Blase) nachgewiesen.
  Verwandte Referenzen: PMID:33231615 PMID:34133077 PMID:11786556 PMID:17164409 PMID:23229815 PMID:12032915
• Gain-of-Funktion-Mutationen in NLRP3 sind verantwortlich für Cryopyrin-assoziierte periodische Syndrome (CAPS), die das familiäre Kälte-autoinflammatorische Syndrom, das Muckle-Wells-Syndrom und das CINCA/NOMID-Syndrom umfassen, und stehen im Zusammenhang mit Taubheit und systemischer Amyloidose.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst das Zytosol, den Inflammasomkomplex, die Golgi-Apparat-Membran, das Endoplasmatische Retikulum und die Mitochondrien. Unter bestimmten Bedingungen kann es sekretiert werden oder im Zellkern nachgewiesen werden.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen erstreckt sich über die Aminosäuren 100–210, die innerhalb der PYD-Domäne des menschlichen NLRP3 liegen. Diese Region ist über Spezies hinweg relativ konserviert, was mit der beobachteten Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-Orthologen übereinstimmt.
• Im Western Blot ist im Gesamtzelllysat von Makrophagen oder anderen NLRP3-exprimierenden Zellen eine einzelne Bande bei etwa 118 kDa zu erwarten.
• Verwenden Sie als Positivkontrolle vorzugsweise LPS-behandelte menschliche THP-1-Zellen oder aus Knochenmark gewonnene Maus-Makrophagen, von denen bekannt ist, dass sie NLRP3 hochregulieren.
• Bei IF/ICC müssen möglicherweise Permeabilisierungs- und Fixierungsbedingungen optimiert werden; die Einbeziehung von unstimulierten gegenüber stimulierten Proben hilft bei der Visualisierung der Inflammasom-Speckenbildung.
• Validieren Sie die Antikörperleistung in Ihrer spezifischen Probenart und Anwendung, da die polyklonale Natur zu Chargenvariabilität führen kann; Pilottestungen mit geeigneten Kontrollen werden empfohlen.

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