NLRP3 Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q8R4B8

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: NLRP3-Funktion und Lokalisation

• NLRP3 (NACHT, LRR und PYD-Domänen-enthaltendes Protein 3, auch bekannt als Cryopyrin) ist ein intrazellulärer Sensor, der die Kernkomponente des NLRP3-Inflammasoms bildet. Dieses vermittelt die Aktivierung als Reaktion auf Defekte der Membranintegrität, was zur Sekretion von IL1B und IL18 sowie zu Pyroptose führt. Zugehörige Referenzen: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356

• NLRP3 initiiert die Bildung eines polymeren Inflammasom-Komplexes mit CASP1 und PYCARD/ASC, der Caspase-1 aktiviert, um Pro-IL1B, Pro-IL18 und Gasdermin-D (GSDMD) zu spalten, was zur Zytokinfreisetzung und zum pyroptotischen Zelltod führt. Zugehörige Referenzen: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:19362020, PMID:16546100, PMID:17008311, PMID:26642356

• Verschiedene pathogen- und schadensassoziierte Stimuli – einschließlich extrazellulärem ATP, Nigericin, Kristallen (Urat, Cholesterin), Amyloid-beta und Partikeln (Asbest, Silica) – lösen die NLRP3-Aktivierung aus, wobei fast alle auf einen intrazellulären K+-Ausstrom konvergieren. Zugehörige Referenzen: PMID:16407888, PMID:16407889, PMID:16407890, PMID:23809161

• Die Aktivierung des NLRP3-Inflammasoms ist auch für die HMGB1-Sekretion erforderlich und steuert eine homöostatische Wundheilungsreaktion, die die Neutrophilen-Migration zu nekrotischen Stellen lenkt, ohne gesundes Gewebe zu schädigen. Zugehörige Referenzen: PMID:22801494, PMID:20947763

• Nach der Aktivierung wird NLRP3 zum Mikrotubuli-Organisationszentrum (MTOC) und dann zu dispergierten trans-Golgi-Netzwerk (dTGN)-Vesikeln transportiert, wo es Phosphatidylinositol-4-phosphat (PtdIns4P) bindet und aktive Inflammasome zusammenbaut – ein Prozess, der durch NEK7 freigeschaltet wird. Zugehörige Referenzen: PMID:26814970, PMID:34615873, PMID:34861190, PMID:30487600

• NLRP3 wird in peripheren Blutleukozyten (Th2-Lymphozyten und Makrophagen) stark und in Osteoblasten in geringem Maße exprimiert, was mit seinen immunologischen und entzündlichen Rollen übereinstimmt. Zugehörige Referenzen: PMID:15302403, PMID:16546100, PMID:26098997, PMID:28847925, PMID:17907925

• Unabhängig von seiner Funktion als Inflammasom-Gerüst fungiert NLRP3 in Th2-Zellen als Transkriptionsregulator, bindet an DNA und moduliert die Expression von IL4, IL5, IL13 und anderen Genen, die für die Th2-Differenzierung und allergische Entzündungen entscheidend sind. Zugehörige Referenzen: PMID:26098997

• NLRP3 besitzt eine intrinsische ATPase-Aktivität und wird durch verschiedene posttranslationale Modifikationen reguliert, einschließlich Phosphorylierung, Palmitoylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivierungsschwelle und Interaktionen steuern. Zugehörige Referenzen: PMID:34861190

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Maus-NLRP3-Aminosäuren 1–93, eine Region, die die Pyrin (PYD)-Domäne enthält. Bedenken Sie, dass der Antikörper sowohl das Volllängenprotein als auch PYD-haltige Fragmente erkennen kann; validieren Sie die Spezifität in Ihrem Modellsystem.
• Für Western Blotting liegt das vorhergesagte Molekulargewicht bei ~118 kDa; posttranslationale Modifikationen können jedoch zu zusätzlichen Banden führen. Verwenden Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen (z. B. LPS+ATP-stimulierte Makrophagen-Lysate) und optimieren Sie die Gelprozentsätze für hochmolekulare Proteine.
• Bei der Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) kann NLRP3 je nach Aktivierungszustand eine punktförmige oder diffuse Färbung aufweisen. Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen sollten optimiert werden, um die native Lokalisation zu erhalten.
• Für ELISA-Anwendungen kann eine Paarung mit einem anderen NLRP3-spezifischen Antikörper für Sandwich-Formate erforderlich sein; die polyklonale Natur kann für die Einfangung oder den Nachweis vorteilhaft sein.

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