NLRP3 Kaninchen-mAk - Q8R4B8

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NLRP3-Funktion und -Lokalisierung

• NLRP3, auch bekannt als Cryopyrin, ist ein Mitglied der NLRP-Familie (NACHT, LRR und PYD-Domänen enthaltend) von intrazellulären Sensoren, die sich zum NLRP3-Inflammasom zusammenlagern. Alternative Namen sind NALP3, CIAS1, Pypaf1, Mmig1 und andere.
• Als Sensorkomponente erkennt NLRP3 eine Vielzahl von pathogen- und schädigungsassoziierten Signalen (z. B. ATP, Nigericin, Kristalle, Amyloid-β) und löst die Bildung des Inflammasoms aus. Dies führt zur Aktivierung von Caspase-1, die pro-IL-1β und pro-IL-18 in ihre aktiven Formen spaltet und durch Gasdermin-D eine Pyroptose induziert. Verwandte Referenzen: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356
• Die Aktivierung erfordert K⁺-Efflux und beinhaltet oft eine Verlagerung zum trans-Golgi-Netzwerk oder zu Mitochondrien-ER-Kontaktstellen. Die ATPase-Aktivität von NLRP3 ist für die Zusammenlagerung des Inflammasoms erforderlich. Verwandte Referenzen: PMID:34861190
• NLRP3 funktioniert auch unabhängig als Transkriptionsfaktor, der die Th2-Differenzierung fördert, indem er an den IL-4-Promotor bindet und die Expression von Th2-Zytokinen reguliert, wodurch allergisches Asthma und Tumorwachstum beeinflusst werden. Verwandte Referenzen: PMID:26098997
• Die subzelluläre Lokalisierung ist dynamisch: Unter Ruhezuständen befindet sich NLRP3 im Zytosol und im endoplasmatischen Retikulum; nach der Aktivierung wandert es zum mikrotubulären Organisationszentrum, zum Golgi-Apparat und wird sezerniert. Es kann auch im Zellkern gefunden werden.
• Hohe Expression in peripheren Blutzellen, einschließlich Makrophagen und Th2-Lymphozyten, konsistent mit seiner Rolle in der angeborenen und adaptiven Immunität. Verwandte Referenzen: PMID:15302403, PMID:26098997
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Palmitoylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Stabilität regulieren. Schlüsselwörter: Aktivator, ATP-Bindung, Inflammasom, Leucin-reiche Wiederholung, Referenzproteom, Ubl-Konjugation.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen die Aminosäuren 1–150 von Maus-NLRP3 erzeugt, was eine Erkennung der N-terminalen PYD-Domäne nahelegt. Er kann sowohl die Vollform als auch die gespaltene Formen erkennen.
• Für Western Blotting (118 kDa Protein) verwenden Sie ein 6–8% SDS-PAGE-Gel und einen verlängerten Transfer (z. B. 2 Stunden bei 100 V) für hochmolekulare Proteine. Fügen Sie ein Positivkontrollen-Lysat aus Maus-Makrophagen oder THP-1-Zellen hinzu, die mit LPS und Nigericin behandelt wurden.
• Für die Immunfluoreszenz permeabilisieren Sie die Zellen mit 0,1% Triton X-100, um an zytosolische und organellassoziierte NLRP3 heranzukommen. Färben Sie gemeinsam mit Organelmarkern, um die aktivierungsabhängige Translokation zu untersuchen.
• Bei der Immunpräzipitation verwenden Sie 1–2 µg Antikörper pro 500 µg Lysat; das Protein erfordert möglicherweise Vernetzung oder eine schonende Lyse, um Inflammasomkomplexe zu erhalten.
• Validieren Sie alle Anwendungen mit geeigneten Mausgeweben oder Zellsystemen, da eine Kreuzreaktivität nur für Maus berichtet wird.

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