NFKB1 Kaninchen pAb für WB, IF/ICC, ELISA - P19838

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NFKB1-Funktion und -Lokalisation

• NFKB1 kodiert für das p105-Vorläuferprotein und seine proteolytisch prozessierte p50-Untereinheit (Nuclear factor NF-kappa-B p50). Während p105 als IκB-ähnlicher Inhibitor fungiert, der NF-κB-Dimere im Zytoplasma zurückhält, ermöglicht die Bildung von p50 DNA-Bindung und transkriptionelle Regulation. Verwandte Referenzen: PMID:1423592
• Die aktive p50-Untereinheit assoziiert mit RELA/p65, um den p65-p50-Heterodimer zu bilden, einen starken transkriptionellen Aktivator, der an die κB-Konsensussequenz 5'-GGRNNYYCC-3' in Zielgen-Enhancern bindet. Verwandte Referenzen: PMID:1740106, PMID:7830764
• NF-κB-Komplexe werden typischerweise durch IκB-Inhibitoren im Zytoplasma zurückgehalten. Die kanonische Aktivierung umfasst IκB-Kinase (IKK)-vermittelte Phosphorylierung und anschließenden proteasomalen Abbau von IκB, wodurch NF-κB freigesetzt wird, um in den Zellkern zu translozieren.
• NF-κB ist ein pleiotroper Transkriptionsfaktor, der in fast allen Zelltypen vorkommt und als zentraler Mediator von Immun- und Entzündungsreaktionen sowie von Zellüberleben, -proliferation und -apoptose wirkt.
• Der p50-p50-Homodimer fungiert als transkriptioneller Repressor, es sei denn, er ist mit BCL3 assoziiert, was ihn in einen Aktivator umwandelt. Somit bestimmt die Dimer-Zusammensetzung die Zielgenexpression.
• NFKB1 lokalisiert in ruhenden Zellen hauptsächlich im Zytoplasma, wandert aber nach Aktivierung in den Zellkern, was mit seiner Rolle als signalresponsiver Faktor übereinstimmt.
• Umfangreiche posttranslationale Modifikationen – einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung – feinabstimmen der NFKB1-Stabilität, DNA-Bindungsaktivität und transkriptionellen Ausgabe.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (Aminosäuren 41–365) liegt innerhalb der N-terminalen Rel-Homologiedomäne, die zwischen p105 und p50 konserviert ist. Beim Western Blotting können sowohl die vollständige p105-Bande (~105 kDa) als auch die prozessierte p50-Bande (~50 kDa) erscheinen; bestätigen Sie die Bandenidentität mit geeigneten Zellextrakten und Behandlungen.
• Für Immunfluoreszenz/ICC ist NFKB1 unter basalen Bedingungen überwiegend zytoplasmatisch; Stimulation mit TNF-α oder IL-1β kann eine rasche Kerntranslokation induzieren. Schließen Sie unbehandelte Kontrollen ein, um die subzelluläre Umverteilung zu visualisieren.
• Bei der Durchführung von ELISA sollten Sie die Verwendung von rekombinantem NFKB1 (p50)-Protein und gepaarten Detektionsantikörpern in Betracht ziehen, um Spezifität und Sensitivität zu validieren. Optimieren Sie Beschichtungs- und Blockierbedingungen für Ihr Assay-Format.
• Als polyklonaler Antikörper sollte die Charge-zu-Charge-Konsistenz mit einem standardisierten positiven Kontrolllysat oder rekombinanten Protein verifiziert werden.

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