MonoMethyl-NONO/p54nrb (R357/R365) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (Q15233) für WB, IF/ICC, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von NONO/p54nrb

NONO (Non-POU-Domänen-haltiges Oktamer-Bindeprotein), auch bekannt als p54nrb, ist ein multifunktionales DNA- und RNA-Bindeprotein, das an verschiedenen nukleären Prozessen beteiligt ist. Es bindet sowohl doppel- als auch einzelsträngige DNA und RNA, ist wahrscheinlich als Heterodimer mit SFPQ am prä-mRNA-Spleißen beteiligt und interagiert mit U5 snRNA. NONO ist zusammen mit PSPC1 für die Bildung von Paraspeckles essentiell und trägt über nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) zur DNA-Reparatur bei, indem es DNA-Enden mit dem Ku70/Ku80-Dimer stabilisiert.

In der Transkriptionsregulation bildet NONO einen Komplex mit SFPQ und NR5A1, um die CYP17-Promotoraktivität zu modulieren. Es reguliert auch die circadiane Uhr durch Unterdrückung der CLOCK-BMAL1-Transaktivierung, beeinflusst die Organisation GABAerger Synapsen und fördert die neuronale Differenzierung durch Rekrutierung von TET1 zu genomischen Loci.

NONO spielt eine entscheidende Rolle in der angeborenen Immunität, indem es sich zum HDP-RNP-Komplex zusammensetzt, der als Plattform für die IRF3-Phosphorylierung dient und so den cGAS-STING-Signalweg als Reaktion auf DNA-Virusinfektionen aktiviert. Während einer HIV-2-Infektion interagiert NONO mit dem viralen Kapsidprotein p24, um die Erkennung viraler DNA durch cGAS zu erleichtern.

Subzellulär ist NONO überwiegend nukleär lokalisiert und konzentriert sich in Nukleoli, nukleären Speckles und punktförmigen Paraspeckles neben Spleiß-Speckles.

NONO wird weit verbreitet in Herz, Gehirn, Plazenta, Lunge, Leber, Skelettmuskel, Niere, Bauchspeicheldrüse und verschiedenen Brusttumor-Zelllinien exprimiert. Das Protein unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung und Methylierung (z. B. Monomethylierung an R456). Dieser Antikörper erkennt spezifisch die mono-methylierten Formen an den Argininen 357 und 365.

Verwandte Referenzen: PMID:11525732, PMID:12403470, PMID:26571461, PMID:22416126, PMID:15590677, PMID:11897684, PMID:28712728, PMID:30270045, PMID:9341872, PMID:19608861, PMID:24129315

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Kaninchen-Polyklonalantikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid mit Monomethylierung an R357 und R365 von humanem NONO/p54nrb hergestellt. Für Western Blot ist eine Bande um 54 kDa zu erwarten. Validieren Sie die Spezifität durch Vergleich der Signalintensität mit nicht-methyliertem Peptid als Wettbewerb oder durch Verwendung methylierungsspezifischer Kontrollen.
• Für IF/ICC kann eine nukleäre Färbung mit Anreicherung in Foci (Paraspeckles) beobachtet werden. Erwägen Sie eine Gegenfärbung mit Paraspeckle-Markern (z. B. PSPC1), um die Lokalisierung zu bestätigen.
• Dem Antikörper wird eine Reaktivität mit humanen und Rattenproben zugeschrieben. Kreuzreaktivität mit anderen Spezies wurde nicht getestet; überprüfen Sie dies in Ihrem Modellsystem.
• Optimale Arbeitsverdünnungen müssen empirisch für jede Anwendung bestimmt werden. Beginnen Sie mit 1:500–1:1000 für WB und 1:50–1:200 für IF/ICC und passen Sie diese bei Bedarf an.
• Der Antikörper wird als Flüssigkeit mit Eisbeutelversand geliefert; lagern Sie ihn nach Erhalt bei −20°C. Vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen.

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