MonoMethyl-Histone H4-R3 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper | P62805 | WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H4

Histon H4 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, um die herum etwa 147 Basenpaare der genomischen DNA gewickelt sind. Als Teil des Histon-Oktamers spielt es eine wesentliche Rolle bei der Regulation der Transkription, der DNA-Replikation, der Reparatur und der chromosomalen Stabilität. Die dynamische posttranslationale Modifikation von Histonen, die kollektiv als „Histon-Code“ bezeichnet wird, steuert die Chromatinstruktur und die Genexpression. Verwandte Referenzen: UniProt P62805

Histon H4 befindet sich überwiegend im Zellkern und assoziiert während des gesamten Zellzyklus mit den Chromosomen. Acetyliertes H4 wurde spezifisch im Kern von Spermatiden der Stufe 11 beobachtet, was auf eine Rolle bei der Chromatinkondensation während der Spermatogenese hinweist. Verwandte Referenzen: UniProt P62805

Der N-terminale Schwanz von Histon H4 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und verschiedenen Acylierungsereignissen. Arginin 3 (R3; entspricht R4 im verarbeiteten Protein nach Entfernung der initiatorischen Methionin) ist ein Schlüsselrest, der monomethyliert, asymmetrisch dimethyliert (durch PRMT1), symmetrisch dimethyliert (durch PRMT5/PRMT7) oder in Citrullin umgewandelt werden kann. Der vorliegende Antikörper erkennt spezifisch die monomethylierte Form von Histon H4 an Arginin 3. Verwandte Referenzen: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777, PMID:16567635

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches monomethyliertes Peptid generiert, das Arginin 3 von humanem Histon H4 (NP_003529.1) entspricht. Bei der Bewertung der Spezifität sollten Peptid-Wettbewerbsassays oder Dot-Blots mit unterschiedlich modifizierten Peptiden in Betracht gezogen werden, um die selektive Erkennung der Monomethylierung gegenüber unmodifiziertem oder dimethyliertem Arginin 3 zu bestätigen.
• Western Blot (WB): Histon H4 hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~11 kDa; für eine optimale Auflösung werden SDS-PAGE-Gele mit hohem Prozentsatz (15 % oder Gradient) empfohlen. Kernextrakte oder säureextrahierte Histone liefern typischerweise stärkere Signale. Aufgrund der geringen Größe sollte die Transfer-Effizienz überprüft und geeignete Membranen (z. B. PVDF 0,2 µm) verwendet werden.
• Immunhistochemie (IHC-P) und Immunzytochemie/Immunfluoreszenz (IF/ICC): Ein vorherrschendes Kernfärbemuster wird erwartet. Die Antigen-Retrieval (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) für Paraffin-eingebettete Schnitte und die Detergenz-Permeabilisierung für Zellen sollten optimiert werden. Die Kreuzreaktivität des Antikörpers mit Maus- und Rattengewebe macht ihn geeignet für die Untersuchung von Histonmodifikationen in verschiedenen Modellsystemen.
• ELISA: Das monomethylierte Peptid kann als Beschichtungsantigen für direkte oder kompetitive ELISAs verwendet werden, um die Bindungsaffinität und Spezifität des Antikörpers zu quantifizieren. Die Verdünnungsfaktoren sollten auf der Grundlage des Assay-Formats titriert werden.
• Artspezifische Kreuzreaktivität: Es wird berichtet, dass der Antikörper humanes, murines und rattiges Histon H4 erkennt, wobei eine breite Palette anderer Arten aufgrund der extremen Sequenzkonservierung von Histon H4 vorhergesagt wird. Für nicht getestete Arten überprüfen Sie die Homologie der Peptidsequenz im Immunogenbereich.
• Überlegungen zu polyklonalen Antikörpern: Da es sich um einen kaninchener polyklonalen Antikörper handelt, können Chargen-zu-Chargen-Schwankungen im Titer und Hintergrund auftreten. Fügen Sie geeignete positive und negative Kontrollen ein und validieren Sie jede neue Charge unter Ihren experimentellen Bedingungen erneut.

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