MonoMethyl-Histone H4-R3 Kaninchen pAk (P62805) | IF/ICC, ELISA Ready Antikörper

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H4 Funktion und Lokalisierung

Histon H4 ist eines der kernhaltigen Histonproteine, die zusammen mit H2A, H2B und H3 das Nukleosom bilden – die fundamentale wiederkehrende Einheit des Chromatins. Jedes Nukleosom besteht aus 147 Basenpaaren der DNA, die um einen Oktamere aus jeweils zwei Kopien der vier kernhaltigen Histone gewickelt sind. Diese Struktur verdichtet die genomische DNA, dient aber auch als dynamische Plattform zur Regulierung der DNA-Zugänglichkeit. Histon H4 spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulierung, der DNA-Reparatur, der DNA-Replikation und der chromosomalen Stabilität. Diese Prozesse werden eng durch eine umfangreiche Reihe posttranslationaler Modifikationen an den Histon-Schwänzen gesteuert, die kollektiv als „Histon-Code“ bezeichnet werden und das Nukleosom-Remodeling sowie die Rekrutierung von Effektorproteinen orchestrieren.

Histon H4 ist vorwiegend im Zellkern lokalisiert, wo es während des gesamten Zellzyklus mit Chromosomen assoziiert ist. Während der Spermatogenese zeigt acetyliertes H4 spezifische Kernlokalisierungsmuster in elongierten Spermatiden.

Der N-terminale Schwanz von Histon H4 unterliegt einer Vielzahl posttranslationaler Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und vielen anderen. Die Methylierung von Argininresten ist ein wichtiges regulatorisches Merkmal. Die MonoMethylierung bei Arginin 3 (H4R3me1) wird durch Protein-Arginin-Methyltransferasen katalysiert und wurde mit der Transkriptionsregulierung und der Etablierung von Chromatin-Zuständen in Verbindung gebracht.

Verwandte Referenzen: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777

Aufgrund seiner hohen Konservierung über Arten hinweg sind die Histon-H4-Sequenz und die Modifikationsmuster von Hefe bis zum Menschen weitgehend erhalten, was die breite Kreuzreaktivität dieses Antikörpers unterstützt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da dieser Antikörper gegen ein synthetisches monomethyliertes Peptid hergestellt wurde, das den Resten um R3 von menschlichem Histon H4 entspricht, wird erwartet, dass er spezifisch die monomethylierte Form von H4R3 erkennt. Forscher sollten die Spezifität unter Verwendung von Peptid-Wettbewerbsassays oder mit Zelllinien validieren, die mit Methyltransferase-Inhibitoren behandelt wurden.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) ist eine Standardfixierung mit 4% Paraformaldehyd, gefolgt von einer Permeabilisierung mit 0,1–0,5% Triton X-100, typischerweise kompatibel mit dem Histon-Nachweis. Eine Kerngegenfärbung (z. B. DAPI) wird empfohlen, um die kernlokalisierung des Signals zu bestätigen.
• In ELISA-Anwendungen kann der Antikörper verwendet werden, um synthetische monomethylierte H4R3-Peptide oder Histon-Extrakte aus Zellen zu detektieren. Erwägen Sie die Optimierung der Beschichtungspuffer und der Antikörperverdünnung für Ihr spezifisches Assay-System.
• Es wird vorhergesagt, dass der Antikörper mit Histon H4 von Mensch, Maus und Ratte sowie einer Vielzahl anderer Arten aufgrund der hohen Sequenzkonservierung kreuzreagiert. Die Kreuzreaktivität sollte jedoch im entsprechenden Probensystem experimentell validiert werden.

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