MonoMethyl-Histon H4-K5 Kaninchen pAb (P62805) für IF/ICC und ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H4

• Funktion: Histon H4 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, das DNA zu Chromatin einwickelt und verdichtet. Dies schränkt die Zugänglichkeit von DNA ein und spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomaler Stabilität. Nukleosomen bestehen aus jeweils zwei Kopien der Histone H2A, H2B, H3 und H4, die ein Oktamer bilden, um das 147 Basenpaare DNA gewickelt sind. Der Histon-Code, vermittelt durch posttranslationale Modifikationen, reguliert die DNA-Zugänglichkeit und Nukleosomen-Remodellierung. Verwandte Referenzen: UniProtKB P62805

• Subzelluläre Lokalisation: Histon H4 ist hauptsächlich im Zellkern lokalisiert und assoziiert mit Chromosomen. Azetylierung kann seine subnukleäre Verteilung beeinflussen; zum Beispiel lokalisiert azetyliertes H4 in Schritt 11 Spermatiden im Zellkern. Verwandte Referenzen: UniProtKB P62805

• Posttranslationale Modifikationen: Histon H4 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, insbesondere an seinem N-terminalen Schwanz. Azetylierung tritt an mehreren Lysinen auf (z. B. K6, K9, K13, K17, K32, K92; siehe PMID:19608861). Methylierung findet sich an Arginin 4 (asymmetrische Dimethylierung durch PRMT1; PMID:11387442) und Lysin 21 (Monomethylierung; PMID:12086618). Monomethylierung an Lysin 5 (K5me1) ist eine spezifische epigenetische Markierung, die von verschiedenen Leserproteinen erkannt wird und an der Transkriptionsregulation beteiligt ist. Weitere Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Citrullinierung und Ubiquitinierung, die gemeinsam einen komplexen regulatorischen Code bilden. Verwandte Referenzen: PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Immunogen-Design: Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid erzeugt, das der N-terminalen Region von menschlichem Histon H4 mit Monomethylierung an K5 entspricht. Bei der Entwicklung ähnlicher Antikörper stellen Sie sicher, dass das Peptid hochrein ist und die Modifikation per Massenspektrometrie bestätigt ist. Erwägen Sie die Verwendung eines nicht methylierten Peptids als Negativkontrolle in Ihren Assays, um die Spezifität zu überprüfen.
• IF/ICC: Für Immunfluoreszenz ist eine Standardfixierung mit 4% Paraformaldehyd und Permeabilisierung mit 0,1-0,5% Triton X-100 typischerweise geeignet. Blockieren Sie unspezifische Bindung mit 5% BSA oder Serum. Die Epitopzugänglichkeit kann variieren; eine Optimierung der Antigen-Retrieval kann in Betracht gezogen werden. Da Histonproteine nuklear sind, erwarten Sie eine Kernfärbung. Fügen Sie Kontrollen ohne primären Antikörper hinzu, um den Hintergrund zu bewerten.
• ELISA: Zum Beschichten verdünnen Sie den Antikörper oder das Antigen in Carbonat/Bicarbonat-Puffer (pH 9,6). Titrieren Sie die Antikörperkonzentration, um das optimale Signal-Rausch-Verhältnis zu bestimmen. Verwenden Sie monomethyliertes Peptid als Positivkontrolle und unmodifiziertes Peptid als Negativkontrolle, um die Spezifität zu bestätigen.
• Allgemein: Wie bei jedem modifikationsspezifischen Antikörper kann es zu Chargenschwankungen kommen; validieren Sie neue Chargen in Ihrem spezifischen experimentellen System. Kreuzreaktivität für Mensch, Maus und Ratte wird basierend auf Sequenzkonservierung vorhergesagt; testen Sie sie auf Ihrer Zielart.

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