MonoMethyl-Histon H3-R2 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (Q16695/P68431) | WB, IF/ICC, ELISA

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H3 (H3.1/H3.1t) Funktion und Lokalisierung

• Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, das DNA zu Chromatin wickelt und kompaktiert. Dies schränkt die DNA-Zugänglichkeit ein und spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Die DNA-Zugänglichkeit wird durch den "Histon-Code" kontrolliert – einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (PTMs) und Nukleosomen-Remodellierung.
• Das Protein lokalisiert im Zellkern und auf Chromosomen.
• Zwei Hauptisoformen sind relevant: H3.1 (kodiert durch mehrere Gene, z.B. H3C1, H3C2 usw., UniProt P68431) wird in den meisten somatischen Zellen exprimiert, während H3.1t (H3-4, HIST3H3, UniProt Q16695) testis-spezifisch ist.
• Der N-terminale Schwanz von Histon H3 unterliegt zahlreichen PTMs, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und anderen. Speziell Arginin 2 (R2) kann methyliert werden. Asymmetrische Dimethylierung an dieser Stelle wird durch PRMT6 katalysiert und ist mit Transkriptionsregulation assoziiert. Monomethylierung an R2 ist ein Zwischenschritt und kann eigene funktionelle Rollen haben. Dieser Antikörper erkennt spezifisch die monomethylierte Form von R2. Verwandte Referenzen: PMID:17898714, PMID:18077460, PMID:18079182

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches monomethyliertes Peptid um R2 von humanem Histon H3. Bei der Durchführung von Western Blot (WB) sollten Kernextrakte oder histonangereicherte Präparationen verwendet werden, um das Signal zu verstärken. Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt ~15 kDa, aber Banden können aufgrund von PTMs oder Proteininteraktionen etwas höher erscheinen.
• Für Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) müssen Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen möglicherweise optimiert werden. Da Histon H3 nukleär ist, wird eine Permeabilisierung mit Triton X-100 oder Methanol empfohlen. Validieren Sie das Färbemuster gegen bekannte nukleäre Marker.
• Bei ELISA sollte ein Methyl-Peptid als Beschichtungsantigen verwendet werden, um die Spezifität für monomethyliertes R2 gegenüber unmodifizierten oder dimethylierten Formen zu bestätigen.
• Die Spezies-Kreuzreaktivität wird als breit vorhergesagt (Mensch, Maus, Ratte und andere), es ist jedoch ratsam, die Reaktivität im spezifischen Probensystem von Interesse zu überprüfen, insbesondere für nicht-säugetierische Spezies.
• Als kaninchen-polyklonaler Antikörper sollte die Chargen-zu-Charge-Konsistenz für kritische quantitative Assays bewertet werden. Das Einbeziehen geeigneter positiver und negativer Kontrollen (z.B. monomethyliertes Peptid als Kompetition) kann die Datenzuverlässigkeit erhöhen.

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