MonoMethyl-Histon H3-K9 Kaninchen monoklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, IHC, ChIP, ELISA

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, der grundlegenden Wiederholungseinheit des Chromatins. Nukleosomen wickeln DNA ein und verdichten sie, wodurch der Zugang für Transkription, Replikation und Reparatur reguliert wird. Sowohl das kanonische replikationsabhängige Histon H3.1 (UniProt P68431) als auch die hodenspezifische Variante H3.1t (UniProt Q16695) teilen sich hochkonservierte N-terminale Enden, an denen wichtige regulatorische Modifikationen stattfinden.

Das N-terminale Ende von Histon H3 unterliegt einer Vielzahl posttranslationaler Modifikationen (PTMs), einschließlich Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und anderen. Diese Modifikationen bilden den „Histon-Code“, der die Chromatinstruktur und Genexpression steuert. Die Methylierung von Lysin 9 (K9; entspricht Position 10 im vollständigen Vorläufer) ist eine kritische epigenetische Markierung. Monomethyliertes H3K9 (H3K9me1) ist mit der transkriptionellen Stilllegung und der Bildung von Heterochromatin assoziiert und kann als Substrat für eine weitere Methylierung durch spezifische Methyltransferasen dienen.

Dieser monoklonale Kaninchen-Antikörper wurde gegen ein synthetisches monomethyliertes Peptid um K9 des menschlichen Histons H3.1 (P68431) generiert und ermöglicht den spezifischen Nachweis von H3K9me1. Er erkennt nicht die unmethylierten oder anders methylierten Formen (z. B. H3K9me2/me3), wie durch das Immunogendesign bestätigt wurde.

Subzelluläre Lokalisation: Histon H3 ist überwiegend nukleär und mit Chromosomen assoziiert. Gewebespezifität: Kanonische H3.1-Varianten werden in den meisten sich teilenden Zellen exprimiert, während die H3.1t-Variante (Q16695) spezifisch in Hodenzellen exprimiert wird.

Zugehörige Referenzen: PMID:11242053; PMID:16267050; PMID:17194708.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches monomethyliertes Peptid um K9; die Spezifität für H3K9me1 sollte mittels Peptid-Kompetitionsassays mit unmodifizierten, mono-, di- und trimethylierten K9-Peptiden als Negativ- und Positivkontrollen überprüft werden.
• Bei Western Blot (WB) und Dot Blot (DB) wird eine Bande/ein Punkt bei etwa 16 kDa erwartet. Stellen Sie eine ordnungsgemäße Histon-Extraktion und Ladungsnormalisierung mit einem Gesamt-H3-Antikörper sicher.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) optimieren Sie die Antigen-Demaskierung und die Blockierungsbedingungen für jeden Gewebe-/Zelltyp, um eine spezifische nukleäre Färbung zu erhalten.
• Die Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) mit diesem Antikörper kann genomische Verteilungen von H3K9me1 kartieren; Vernetzung und Antikörpermenge erfordern eine empirische Optimierung. Erwägen Sie eine sequentielle ChIP, um die Monomethylierungsspezifität zu bestätigen.
• Aufgrund der hohen Sequenzkonservierung des H3-N-Terminus wird eine Kreuzreaktivität des Antikörpers mit einer Vielzahl von Spezies vorhergesagt; eine Validierung im relevanten Probensystem (z. B. Maus, Ratte) wird empfohlen.
• Im ELISA kann der Antikörper als Fänger- oder Nachweisreagenz zur Quantifizierung von H3K9me1 in extrahierten Histonen oder Nukleosomen dienen.

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