MonoMethyl-Histone H3-K79 Kaninchen polyklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, IHC, ChIP

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, der fundamentalen Wiederholungseinheit von Chromatin. Zusammen mit H2A, H2B und H4 verpackt es genomische DNA in kompakte Strukturen und reguliert so den Zugang für DNA-templatierte Prozesse wie Transkription, Replikation, Reparatur und chromosomale Stabilität. Die dynamische Modulation der Chromatinarchitektur wird durch eine komplexe Reihe posttranslationaler Modifikationen an Histon-Schwänzen und globulären Domänen erreicht, die kollektiv als „Histon-Code“ bezeichnet werden. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Histon H3 lokalisiert sich primär im Zellkern und ist während des gesamten Zellzyklus mit Chromosomen assoziiert. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Während kanonische Histon-H3-Varianten ubiquitär exprimiert werden, zeigen bestimmte Histon-H3-Isoforme gewebsspezifische Muster. Zum Beispiel wird Histon H3.1t (H3t), codiert durch H3-4 (HIST3H3), vorwiegend in testikulären Zellen exprimiert. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695

Histon H3 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und anderen, an verschiedenen Resten. Darunter ist die Methylierung an Lysin 79 (K79) ein konservierter epigenetischer Marker, wobei die Mono-, Di- und Trimethylierungszustände jeweils mit unterschiedlichen Chromatinfunktionen assoziiert sind. Dieser polyklonale Antikörper wurde unter Verwendung eines synthetischen monomethylierten Peptids um K79 entwickelt, um die K79me1-Modifikation spezifisch zu detektieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen wurde als synthetisches Peptid entworfen, das der Region um Lysin 79 von menschlichem Histon H3 entspricht und eine Monomethylgruppe an K79 trägt. Dies stellt eine spezifische Reaktivität gegenüber der monomethylierten Form sicher; die Kreuzreaktivität mit unmethylierten oder höheren Methylierungszuständen sollte im experimentellen Kontext bewertet werden.
• Fürsten Sie für Western Blotting (WB) die Verwendung von säureextrahierten Histonen oder chromatinangereicherten Kernfraktionen in Betracht, um die Detektion zu verbessern, wobei eine typische Proteinf wanderung bei ~15 kDa beobachtet wird.
• Validieren Sie in der Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) den Antikörper unter geeigneten Fixierungs- und Antigen-Retrieval-Bedingungen für das Gewebe oder den Zelltyp von Interesse.
• Optimieren Sie für Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) und ChIP-Sequenzierung (ChIP-seq) die Fragmentierung und die Antikörpermenge für die spezifische Chromatin-Eingabe; die Einbeziehung positiver und negativer genomischer Loci für H3K79me1 wird empfohlen.
• In ELISA-basierten Assays kann der Antikörper verwendet werden, um die Peptidspezifität zu bestätigen; validieren Sie die Leistung mit einem Panel methylierter und unmethylierter Peptide.

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