MonoMethyl-Histon H3-K4 Kaninchen-Monoklonal-Antikörper (Q16695/P68431) für WB, ChIP, IF/ICC und epigenetische Forschung

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, welches die DNA wickelt und zu Chromatin verdichtet. Diese Verdichtung begrenzt die Zugänglichkeit der DNA für die zellulären Maschinen, die DNA als Vorlage benötigen, und spielt damit eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Die Zugänglichkeit der DNA wird fein abgestimmt durch einen komplexen Satz post-translationaler Modifikationen an Histonen, bekannt als der Histon-Code, und durch Nukleosom-Remodelling.

Histon H3 lokalisiert im Zellkern und ist ein integraler Bestandteil der Chromosomen. Zwei Varianten sind hier relevant: Das kanonische Histon H3.1 (kodiert durch mehrere Gene wie H3C1, H3C2 usw., SWISS P68431) ist ubiquitär exprimiert, während Histon H3.1t (SWISS Q16695) testisspezifisch ist. Beide teilen sich die gleiche grundlegende Rolle in der Chromatinstruktur.

Lysin 4 von Histon H3 (H3K4) ist eine Hauptstelle für diverse post-translationale Modifikationen, einschließlich Mono-, Di- und Trimethylierung, Acetylierung und andere. Monomethylierung von H3K4 (H3K4me1) ist typischerweise mit Enhancer-Regionen und aktiver Gentranskription assoziiert. Dieser Antikörper wurde gegen ein monomethyliertes Peptid rund um H3K4 hergestellt und bietet Spezifität für diesen Modifikationszustand.

Verwandte Referenzen: PMID:16267050, PMID:16457588, PMID:17194708.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper ist spezifisch für monomethyliertes H3K4. Für optimale Ergebnisse schließen Sie positive und negative Kontrollproben ein (z. B. Peptide mit unmodifiziertem, mono-, di- oder tri-methyliertem K4), um die Spezifität zu bestätigen.
• Western Blot (WB): Verwenden Sie Kernextrakte oder ganze Zelllysate. Eine Bande bei ca. 16 kDa wird erwartet. Bestimmen Sie die optimale Verdünnung des Primärantikörpers empirisch (z. B. Startbereich 1:500–1:2000) und kombinieren Sie ihn mit einem geeigneten HRP-konjugierten Sekundärantikörper.
• Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP): Geeignet für ChIP. Vernetzen Sie Chromatin, scheren Sie es und führen Sie eine Immunopräzipitation mit dem Antikörper durch. Validieren Sie die Anreicherung mittels qPCR an bekannten H3K4me1-Zielloci.
• Immunfluoreszenz (IF/ICC): Fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen angemessen. Erwarten Sie eine exklusive Kernfärbung. Gegenfärbung mit DAPI oder Ähnlichem zur Bestätigung der Lokalisierung.
• IHC-P: Eine Antigen-Retrieval kann erforderlich sein; optimieren Sie die Bedingungen für jeden Gewebetyp.
• Dot Blot (DB) und ELISA: Stellen Sie sicher, dass die Peptidkonzentration und die Blockierungsbedingungen optimiert sind, um unspezifische Bindungen zu minimieren.
• Kreuzreaktivität: Dieser Antikörper erkennt ein breites Spektrum von Spezies, einschließlich Pflanzen (Arabidopsis, Reis, Weizen). Für Pflanzenproben passen Sie die Extraktionsprotokolle aufgrund der starreren Zellwand an und optimieren Sie die Detektionsbedingungen.

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