MonoMethyl-Histon H3-K36 Kaninchen-mAk (Q16695/P68431) für WB, DB, IHC-P, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H3 Funktion und Lokalisierung

Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, das DNA zu Chromatin verpackt und wickelt. Diese Kompaktierung schränkt den Zugang der DNA für zelluläre Maschinerien ein, die DNA als Vorlage benötigen. Folglich spielen Histone eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Der DNA-Zugang wird durch einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen von Histonen, zusammenfassend als Histon-Code bekannt, und durch Nukleosomen-Remodellierung reguliert. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Mehrere Gene kodieren für Histon H3-Varianten. Die Produktbemerkungen und Aliasse umfassen H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12 und HIST1H3A, was die verschiedenen replikationsabhängigen Histon H3.1-Gene widerspiegelt. Zusätzlich ist die testisspezifische Variante H3.1t (H3t, kodiert durch H3-4 / HIST3H3) durch die SWISS-Accession Q16695 repräsentiert. Diese Varianten sind in ihrer Sequenz sehr ähnlich. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Subzellulär ist Histon H3 im Zellkern lokalisiert und eine Hauptkomponente der Chromosomen. Seine Anwesenheit ist allgegenwärtig in Nukleosomen im gesamten Genom. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Posttranslationale Modifikationen von Histon H3, einschließlich Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und anderen, feinabstimmen Chromatinstruktur und -funktion. Monomethylierung an Lysin 36 (K36) ist eine solche Modifikation. Dieser Antikörper detektiert spezifisch die monomethylierte Form von K36 und wurde unter Verwendung eines synthetischen monomethylierten Peptid-Immunogens gegen diese Reststelle generiert. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das vorhergesagte Proteingewicht von Histon H3 beträgt etwa 15 kDa. Aufgrund seiner stark basischen Natur wandert Histon H3 jedoch bei der SDS-PAGE oft bei einem leicht höheren scheinbaren Molekulargewicht. Überprüfen Sie das spezifische Wanderungsmuster in Ihrem Proben-System.
• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches monomethyliertes Peptid um K36 hergestellt. Es wird erwartet, dass er die monomethylierte Form spezifisch gegenüber unmodifizierten oder anderen methylierten Zuständen erkennt. Bestätigen Sie die Spezifität mittels Peptid-Kompetitions-Assays oder durch Vergleich von Signalen aus Zelllysaten, die mit Methylierungs-modifizierenden Agenzien behandelt wurden.
• Für Western Blot (WB) und Dot Blot (DB) sollten Sie Histon-Extraktionsprotokolle in Betracht ziehen, die nukleäre Proteine anreichern, um die Nachweisempfindlichkeit zu verbessern.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) müssen die Antigen-Retrieval-Bedingungen (z.B. Citratpuffer pH 6.0 oder EDTA-Puffer pH 9.0) möglicherweise optimiert werden. Schließen Sie bekannte positive und negative Kontrollgewebe ein, um die Färbespezifität zu bewerten.
• ELISA kann für Hochdurchsatz-Screening oder Titrationsexperimente verwendet werden. Kombinieren Sie diesen Antikörper mit einem geeigneten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper, konjugiert mit HRP oder einem anderen Reporterenzym, für die Detektion.

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