MonoMethyl-Histon H3-K18 (Q16695/P68431) Kaninchen-mAk für ChIP & CUT&Tag | WB, IHC-P, IF, ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

Histone sind die wichtigsten Proteinkomponenten der Chromatin und fungieren als Spulen, um die DNA aufzuwickeln. Histon H3 bildet zusammen mit H2A, H2B und H4 den Nukleosomenkern. Diese Nukleosomen verdichten die DNA und regulieren ihre Zugänglichkeit für Transkription, Replikation, Reparatur und chromosomale Stabilität. Der N-terminale Schwanz von Histon H3 unterliegt zahlreichen posttranslationalen Modifikationen (PTMs), einschließlich Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und anderen, die zusammen den "Histon-Code" bilden und die Chromatindynamik und Genexpression steuern.

Lysin 18 (K18) von Histon H3 (entspricht Position 19 im Präprotein) ist ein Schlüsselrest, der monomethyliert werden kann. Diese Modifikation beeinflusst zusammen mit anderen PTMs an dieser Stelle die Bindung von Effektorproteinen und moduliert die Chromatinstruktur. Während die Acetylierung von K18 oft mit transkriptioneller Aktivierung verbunden ist, können Methylierungszustände kontextabhängige Effekte haben. Die Monomethylierung von H3K18 wurde mit der Regulation der Genexpression und der Erhaltung einer korrekten Chromatinfunktion in Verbindung gebracht.

Verwandte Referenzen: PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708.

Die SWISS-Einträge Q16695 (Histon H3.1t) und P68431 (Histon H3.1) stellen zwei menschliche Histon-H3-Varianten dar. Q16695 wird überwiegend in Hodenzellen exprimiert, wo es das kanonische H3.1 während der Spermatogenese ersetzt. P68431 ist ein replikationsabhängiges Histon, das in somatischen Zellen exprimiert wird und weit verbreitet ist. Beide Varianten lokalisieren zum Zellkern und Chromosom.

Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Der Antikörper wurde unter Verwendung eines synthetischen monomethylierten Peptids um K18 hergestellt. Um die Spezifität für die monomethylierte Form sicherzustellen, sollten Sie bei der ersten Validierung einen Peptid-Konkurrenztest mit den entsprechenden nicht modifizierten oder di-/trimethylierten Peptiden durchführen.
• Für Western Blot (WB) werden Histonextrakte aus menschlichen, Maus- oder Rattenzellen als Ausgangsmaterial empfohlen. Es ist eine spezifische Bande um 15 kDa zu erwarten. Führen Sie geeignete Kontrollen durch, einschließlich eines Total-H3-Antikörpers, um eine gleichmäßige Beladung zu bestätigen.
• Bei Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) und CUT&Tag-Experimenten ist die Titration des Antikörpers entscheidend. Es empfiehlt sich, positive Kontrollgenomregionen einzubeziehen, von denen bekannt ist, dass sie H3K18-Monomethylierung enthalten (falls verfügbar), sowie negative Kontrollloci. Vernetzungsbedingungen können die Epitopzugänglichkeit beeinflussen; berücksichtigen Sie sowohl native als auch vernetzte ChIP-Protokolle.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) müssen möglicherweise die Antigen-Retrieval-Bedingungen optimiert werden. Es wird empfohlen, Gewebe- oder Zellproben mit dokumentierten H3K18me1-Spiegeln zur Etablierung der Färbespezifität zu verwenden.
• ELISA- und Dot-Blot (DB)-Anwendungen können für schnelle Antikörpertiter- und Spezifitätsprüfungen gegen verschiedene Peptide unterschiedlichen Methylierungsstatus verwendet werden.

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