MICA Kaninchen-pAk für WB, ELISA - Q29983

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: MICA-Funktion und -Lokalisierung

• MICA (MHC-Klasse-I-Polypeptid-abhängige Sequenz A) ist ein Mitglied der MIC-Familie von stressinduzierbaren Proteinen, auch bekannt als MIC-A oder PERB11.1.
• Es fungiert als Ligand für das aktivierende Immunrezeptor NKG2D/KLRK1, das auf fast allen menschlichen natürlichen Killerzellen (NK-Zellen), γδ-T-Zellen und CD8+ αβ-T-Zellen exprimiert wird. Verwandte Referenzen: PMID:11491531 PMID:11777960
• Die Bindung von NKG2D durch MICA stimuliert die NK-Zell-vermittelte Zytotoxizität und Zytokinproduktion und spielt eine zentrale Rolle in der angeborenen und adaptiven Immunantwort. Verwandte Referenzen: PMID:10426993
• MICA wird unter Bedingungen von zellulärem Stress hochreguliert, einschließlich viraler und bakteriellet Infektionen, DNA-Schäden und Hitzeschock, und dient somit als Gefahrensignal für das Immunsystem.
• Das Protein ist hauptsächlich an der Zellmembran lokalisiert, kann aber auch im Zytoplasma gefunden werden; es ist weitgehend in Geweben exprimiert, außer im zentralen Nervensystem, mit starker Expression im Magenepithel, in Keratinozyten, Endothelzellen und verschiedenen epithelialen Tumoren.
• MICA durchläuft mehrere posttranslationale Modifikationen, einschließlich N-verknüpfter Glykosylierung, Palmitoylierung und Disulfidbrückenbildung, und enthält eine Immunglobulin-ähnliche Domäne.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen, und das Protein kann proteolytisch von der Zelloberfläche abgespalten werden, wodurch eine lösliche Form entsteht, die Immunantworten moduliert.
• MICA ist an der Tumor-Immunüberwachung, Autoimmunerkrankungen und Wirt-Virus-Interaktionen beteiligt, was es zu einem wichtigen Biomarker und therapeutischen Ziel in der Onkologie und Immunologie macht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das die Aminosäuren 24–307 (NP_000238.1) abdeckt, was der extrazellulären Domäne von menschlichem MICA entspricht. Dieser Bereich wird vorhergesagt exponiert zu sein und kann native Epitope darbieten.
• Beim Western Blotting ist unter reduzierenden Bedingungen ein Band bei ca. 43 kDa zu erwarten; aufgrund der Glykosylierung kann jedoch das beobachtete Molekulargewicht etwas höher sein. Eine Validierung im entsprechenden Probensystem wird empfohlen.
• Für ELISA-Anwendungen sollte die Beschichtung mit dem rekombinanten Protein oder die Verwendung eines Sandwich-Formats optimiert werden; erwägen Sie eine Schachbrett-Titration für optimale Antikörper- und Antigenkonzentrationen.
• Der Antikörper zeigt Kreuzreaktivität mit Mensch, Maus und Ratte, aber die Leistung in anderen Spezies wurde nicht getestet und sollte unabhängig validiert werden.
• Standard-Blocking mit 5% Magermilch oder BSA wird häufig für WB verwendet; wenn ein hoher Hintergrund beobachtet wird, versuchen Sie, den Blockierungsreagenzien oder die Pufferbedingungen anzupassen.

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