[KO-validiert] IRF3-Kaninchen-mAb – Q14653

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von IRF3

• IRF3 ist ein zentraler transkriptioneller Regulator Typ-I-Interferon-(IFN)-abhängiger Immunantworten und spielt eine entscheidende Rolle bei der angeborenen Immunität gegen DNA- und RNA-Viren. Es reguliert die Transkription von Typ-I-IFN-Genen (IFN-alpha und IFN-beta) und IFN-stimulierten Genen (ISG), indem es an Interferon-stimulierte Response-Elemente (ISRE) in deren Promotoren bindet. Verwandte Referenzen: PMID:22394562 PMID:24049179 PMID:25636800 PMID:11846977 PMID:16846591 PMID:16979567
• In nicht infizierten Zellen befindet sich IRF3 in einer inaktiven Form im Zytoplasma. Nach einer Virusinfektion, durch doppelsträngige RNA (dsRNA) oder eine Toll-like-Rezeptor-(TLR)-Signalübertragung wird es durch die Kinasen IKBKE und TBK1 phosphoryliert. Dies induziert eine Konformationsänderung, die zur Dimerisierung, zur Translokation in den Zellkern und zur Verbindung mit CREBBP führt, wodurch der dsRNA-aktivierte Faktor-1-(DRAF1)-Komplex entsteht, der Typ-I-IFN- und ISG-Gene aktiviert. Verwandte Referenzen: PMID:22394562 PMID:25636800 PMID:27302953 PMID:16154084 PMID:33440148
• IRF3 kann in Makrophagen unterschiedliche Genexpressionsprogramme aktivieren und in primären Makrophagen eine ausgeprägte Apoptose induzieren. Als Reaktion auf eine Infektion mit dem Sendai-Virus wird IRF3 durch TOMM70:HSP90AA1 zu den Mitochondrien rekrutiert, wo es den Apoptosekomplex TOMM70:HSP90AA1:IRF3:BAX bildet und Apoptose induziert. Verwandte Referenzen: PMID:16846591 PMID:25609812
• IRF3 ist ein zentraler Transkriptionsfaktor, der die IFN-Antwort während einer SARS-CoV-2-Infektion reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:33440148
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst Zytoplasma, Zellkern und Mitochondrien und steht im Einklang mit seiner dynamischen Regulation während der Signalübertragung.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Phosphorylierung (entscheidend für die Aktivierung), Acetylierung, Disulfidbrückenbildung, Isopeptidbindung und Ubl-Konjugation.
• IRF3 wird konstitutiv in verschiedenen Geweben exprimiert, was seine umfassende Rolle bei der antiviralen Abwehr unterstreicht.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen, die seine Funktion in unterschiedlichen Kontexten potenziell modulieren können.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 1–260 des humanen IRF3 (NP_001184051.1) und deckt die N-terminale Region ab, die DNA-bindende und regulatorische Domänen umfasst. Dieses Design kann sowohl unphosphorylierte als auch phosphorylierte Formen nachweisen und eignet sich daher zur Bestimmung der Gesamtmenge an IRF3.
• Für den Western Blot sollten Lysate aus Zellen verwendet werden, die mit viralen Mimetika (z. B. Poly(I:C)) oder Interferonen stimuliert wurden, um aktivierungsabhängige Bandenverschiebungen als Hinweis auf eine Phosphorylierung zu beobachten. Die Validierung sollte im relevanten Probensystem erfolgen, beispielsweise in virusinfizierten oder TLR-aktivierten Zellen.
• Bei Immunhistochemie und Immunfluoreszenz sollten die Antigenrückgewinnung und geeignete Fixierungsmethoden optimiert werden, um die native Konformation von IRF3 zu erhalten, insbesondere da IRF3 eine phosphorylierungsabhängige Translokation in den Zellkern durchläuft.
• Für die Immunpräzipitation sollten milde Lysebedingungen gewährleistet werden, um Protein-Protein-Interaktionen zu erhalten, da IRF3 Komplexe mit Partnern wie CREBBP und TBK1 bildet.
• Die Reaktivität des Antikörpers mit Maus und Ratte (basierend auf Sequenzhomologie) ermöglicht Spezies-übergreifende Untersuchungen. Es wird jedoch empfohlen, die Reaktivität im jeweiligen experimentellen Modell zu überprüfen.

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