[KO-validiert] Kaninchen-monoklonaler Antikörper gegen gespaltenes Gasdermin E (N-terminal) für WB, IHC-P, ELISA – O60443

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Gasdermin E

• Gasdermin E (GSDME), auch bekannt als DFNA5 oder ICERE-1, ist ein Mitglied der Gasdermin-Familie porenbildender Proteine. Es wird als Vorläuferprotein exprimiert, das zur Freisetzung eines aktiven N-terminalen Fragments gespalten wird, wobei durch alternatives Spleißen mehrere Isoformen entstehen.
• Nach der Spaltung durch Caspase-3 (CASP3) oder Granzyme B (GZMB) an Asp270 transloziert das N-terminale Fragment zur Plasmamembran, oligomerisiert und bildet Poren mit einem inneren Durchmesser von 10–15 nm, wodurch Pyroptose und die Freisetzung entzündlicher Zytokine wie IL-1β und IL-16 ausgelöst werden. Zugehörige Referenzen: PMID:27281216, PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:33852854
• Die durch GSDME vermittelte Pyroptose wirkt als Mechanismus der Tumorsuppression: Durch natürliche Killerzellen (NK-Zellen) freigesetztes Granzyme B spaltet GSDME in Tumorzellen und induziert Pyroptose sowie eine starke Antitumorimmunität. Zugehörige Referenzen: PMID:21522185, PMID:32188940, PMID:31953257
• Nachgeschaltet des mitochondrialen Apoptosewegs und infolge von DNA-Schäden kann GSDME Apoptose in sekundäre Nekrose und Pyroptose umwandeln, teilweise über die p53/TP53-Signalübertragung. Zugehörige Referenzen: PMID:28045099, PMID:16897187
• GSDME besitzt eine bakterizide Aktivität und fördert als Reaktion auf mikrobielle Infektionen die Pyroptose, einschließlich der durch das Zika-Virus induzierten plazentaren Pyroptose, die den Ausgang für den Fötus beeinflusst. Zugehörige Referenzen: PMID:27281216
• Im Hinblick auf die subzelluläre Lokalisierung befindet sich das vollständige GSDME hauptsächlich im Zytoplasma, während das gespaltene N-terminale Fragment an die Zellmembran lokalisiert ist, wo es Poren bildet.
• GSDME wird in der Cochlea und in vielen Geweben in niedrigen Konzentrationen exprimiert, wobei die höchste Expression in der Plazenta beobachtet wird. Mutationen in diesem Gen stehen mit autosomal-dominanter, nicht-syndromaler Hörbeeinträchtigung in Zusammenhang. Zugehörige Referenzen: PMID:9771715
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Palmitoylierung und der Bildung von Isopeptidbindungen, können die Aktivierung und den Einbau von GSDME in die Membran regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen des Antikörpers wurde um die Spaltstelle Asp270 entwickelt, wodurch es spezifisch für das N-terminale Fragment ist. Validieren Sie die Spezifität in Ihrem experimentellen System mithilfe geeigneter positiver und negativer Kontrollen (z. B. unbehandelte Proben im Vergleich zu Proben mit Induktoren von Apoptose/Pyroptose).
• Beim Western Blot sind aufgrund des ungespaltenen Vorläuferproteins (ca. 55 kDa) und der gespaltenen Fragmente (N-terminal ca. 11 kDa und 35 kDa, abhängig von der Isoform) mehrere Banden zu erwarten. Optimieren Sie die Beladungs- und Detektionsbedingungen, um diese Formen voneinander zu unterscheiden.
• Führen Sie bei der IHC-P eine Antigenrückgewinnung durch und testen Sie eine Verdünnungsreihe, um eine optimale Färbung zu erzielen. Der Antikörper wurde für humane Proben validiert; eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies ist nicht berichtet. Bestätigen Sie daher die Reaktivität bei Verwendung nicht-humaner Gewebe.
• Für den ELISA kann ein C-terminal-spezifischer Antikörper als Paarungspartner in einem Sandwich-ELISA zur Quantifizierung von gespaltenem GSDME eingesetzt werden. Führen Sie Pilotexperimente durch, um Empfindlichkeit und dynamischen Messbereich zu bestimmen.
• Überwachen Sie in Pyroptose-Studien die Spaltung als Messgröße und kombinieren Sie diese mit Aktivitätstests für Caspase-3 oder dem Nachweis von Granzyme B, um mechanistische Erkenntnisse zu gewinnen.

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