KO validierter polyklonaler Kaninchen-Anti-HMGB1-Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P09429

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von HMGB1

• HMGB1 (High Mobility Group Protein B1), das durch das HMGB1-Gen kodiert wird, ist ein allgegenwärtiges nicht-histonisches chromatinassoziiertes Protein, das auch aktiv sezerniert oder passiv freigesetzt wird, um als gefahrenassoziiertes molekulares Muster (DAMP) und Zytokin/Chemokin zu wirken.
• Im Zellkern bindet HMGB1 bevorzugt an nicht-kanonische DNA-Strukturen (einzelsträngige, kreuzförmige, superhelikale und Z-DNA) und biegt die DNA, um die Chromatinremodellierung zu erleichtern und den Zugang von Transkriptionsfaktoren zu verbessern (PubMed:20123072). Es ist an mehreren DNA-Reparaturwegen beteiligt, darunter die Nukleotid-Excisionsreparatur, die Missmatch-Reparatur und die Basen-Excisionsreparatur (PubMed:15014079, PubMed:16143102, PubMed:17803946, PubMed:19360789, PubMed:19446504). Verwandte Referenzen: PMID:20123072 PMID:15014079 PMID:16143102 PMID:17803946 PMID:19360789 PMID:19446504
• Im Zytoplasma fördert HMGB1 die Autophagie durch kompetitive Störung der BECN1:BCL2-Wechselwirkung (PubMed:20819940) und ist an oxidativer stressinduzierter Autophagie beteiligt (PubMed:21395369). Verwandte Referenzen: PMID:20819940 PMID:21395369
• Extrazellulär bestimmt der Redoxzustand von HMGB1 seine Funktion: vollständig reduziertes HMGB1 wirkt als Chemokin, die Disulfidform als proentzündliches Zytokin und die Sulfonylform fördert die immunologische Toleranz (PubMed:23446148, PubMed:23519706, PubMed:23994764). Es bindet an mehrere Oberflächenrezeptoren, darunter AGER/RAGE, TLR2 und TLR4, um die Zytokinfreisetzung und Immunzellrekrutierung zu induzieren (PubMed:12765338, PubMed:18354232, PubMed:19264983, PubMed:15607795, PubMed:20547845). Verwandte Referenzen: PMID:23446148 PMID:23519706 PMID:23994764 PMID:12765338 PMID:18354232 PMID:19264983 PMID:15607795 PMID:20547845
• HMGB1 erleichtert den Eintrag von SARS-CoV und SARS-CoV-2 durch Regulation der Expression der viralen Rezeptoren ACE2 und CTSL über Chromatinmodulation (PubMed:33147444) und wird für die SARS-CoV-2 ORF3A-induzierte Retikulophagie benötigt (PubMed:35239449). Verwandte Referenzen: PMID:33147444 PMID:35239449
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung, ADP-Ribosylierung und Oxidation, regulieren dynamisch die subzelluläre Lokalisation, die DNA-Bindungsaffinität und die immunmodulatorischen Aktivitäten von HMGB1.
• HMGB1 ist ubiquitär exprimiert und wurde in Blutplättchen nachgewiesen (PubMed:11154118). Verwandte Referenzen: PMID:11154118

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 69-168 und deckt die konservierte HMG-Box B und einen Teil des sauren C-Schwanzes ab. Diese Region ist bei Menschen, Mäusen und Ratten hoch konserviert, was die Kreuzreaktivität des Antikörpers unterstützt.
• Für den Western Blot ist eine Bande um 25 kDa zu erwarten; beachten Sie, dass posttranslationale Modifikationen zu leichten Verschiebungen führen können. Eine Knockout-Validierung wurde durchgeführt; erwägen Sie die Einbeziehung geeigneter positiver und negativer Kontrollen.
• Für IHC-P kann eine Antigenrückgewinnung erforderlich sein. Optimieren Sie die Färbebedingungen mit bekannten positiven Gewebekontrollen (z. B. Gewebe mit hoher HMGB1-Expression wie lymphoide Organe oder Tumore).
• Im ELISA kann der Antikörper zum Capture oder zur Detektion verwendet werden; jedoch sollte die Paarung mit einem passenden Detektionsantikörper für das spezifische Assayformat validiert werden.
• Da HMGB1 ein DAMP ist, das aus geschädigten Zellen freigesetzt werden kann, vermeiden Sie übermäßige Zelllyse oder Gewebeschäden während der Probenvorbereitung, um den Hintergrund zu minimieren.

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