[KO Validiert] Anti-HER2/ErbB2 Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P04626

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HER2/ErbB2 Funktion und Lokalisierung

• HER2/ErbB2 ist ein durch das ERBB2-Gen (GenID: 2064) kodierter Rezeptor-Tyrosin-Proteinkinase und ein Mitglied der Epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor-Familie (EGFR/ErbB). Das Volllängenprotein ist ein Single-Pass Typ I Membranprotein aus 1255 Aminosäuren mit einem vorhergesagten Molekulargewicht von 137,9 kDa (beobachtet bei ca. 138 kDa).
• Es fungiert als Korezeptor in Neuregulin-Rezeptorkomplexen, der für die ligandenabhängige Signalgebung essentiell ist, erfordert jedoch die Heterodimerisierung mit anderen ErbB-Familienmitgliedern (z. B. EGFR, ErbB3, ErbB4) für die hochaffine Ligandenbindung und Kinaseaktivierung.
• Die HER2-Signalgebung reguliert das Auswachsen und die Stabilisierung peripherer Mikrotubuli über den MEMO1-RHOA-DIAPH1-Weg, hemmt GSK3B und fördert die Membranassoziation von APC und CLASP2, was wiederum die Mikrotubuli-Capture und -Stabilisierung erleichtert.
• Im Zellkern wirkt HER2 als transkriptioneller Regulator, indem es an den PTGS2/COX-2-Promotor (5’-TCAAATTC-3’ Sequenz) bindet, um die Transkription zu aktivieren, und fördert zudem die CDKN1A-Expression durch Beteiligung von STAT3 und SRC sowie die rRNA-Gen-Transkription durch RNA-Pol I, was die Proteinsynthese und das Zellwachstum verstärkt.
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst die Zellmembran, Ruffle-Membran, frühes Endosom, Zytoplasma (perinukleäre Region) und den Zellkern, was die vielfältigen Signal- und Transkriptionsrollen widerspiegelt.
• HER2 ist in einer Vielzahl von Tumorgeweben überexprimiert, einschließlich primärem Brust-, Dünndarm-, Speiseröhren-, Nieren- und Mundkrebs, was es zu einem kritischen Biomarker und therapeutischen Ziel macht.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung (Phosphoprotein) und Glykosylierung; das Protein verfügt auch über ein Signalpeptid, Disulfidbrücken sowie alternative Initiierungs- und Spleiß-Isoformen.
• UniProt-Schlüsselwörter heben seine biologischen Rollen hervor: Aktivator, alternatives Spleißen, ATP-Bindung, Zellmembran, Krankheitsvariante, Kinase, Rezeptor, Signal, Transkriptionsregulation, Transferase, Transmembran.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Die Immunogen-Sequenz (aa 1156–1255) befindet sich im C-terminalen zytoplasmatischen Bereich von HER2; daher wird erwartet, dass dieser Antikörper die Volllängenform (~138 kDa) im Western Blot (WB) erkennt, mit potenzieller Detektion von trunkierten oder alternativ gespleißten Isoformen, wenn sie dieses Epitop beibehalten.
• Für den WB verwenden Sie reduzierende Bedingungen; das glykosylierte und phosphorylierte reife Protein kann etwas höher wandern. Validieren Sie die Bandspezifität mithilfe von HER2-positiven und -negativen Zelllinien (z. B. SK-BR-3 vs. MCF-7) und, falls verfügbar, KO-validierten Lysaten, wie durch die Produktvalidierung angegeben.
• In ELISA-Anwendungen sollten Sie aufgrund des intrazellulären Epitops die Verwendung von Peptid-Beschichtung oder direkter Antigen-Capture in Betracht ziehen. Optimieren Sie die Beschichtungsbedingungen und Antikörperverdünnungen in relevanten Probenmatrizes.
• Aufgrund der hohen Expression in Tumoren können Lysate aus Brustkrebszelllinien oder Tumorgeweben starke Signale erzeugen; Fügen Sie geeignete Ladungskontrollen hinzu und normalisieren Sie auf das Gesamtprotein.

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