[KO-validiert] Monoklonaler Anti-GSDME-Antikörper (Volllänge+N-terminal) für WB, IP, IHC-P, ELISA – O60443

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Gasdermin-E

• Gasdermin-E (GSDME/DFNA5/ICERE-1) ist die Vorstufe eines porenbildenden Proteins, das nach Spaltung durch CASP3 oder Granzym B die Pyroptose auslöst, eine Form des programmierten Zelltods, die sich von der Apoptose unterscheidet. Verwandte Referenzen: PMID:27281216, PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:33852854
• Das abgespaltene N-terminale Fragment transloziert zur Plasmamembran, oligomerisiert zu Homooligomeren und bildet Poren mit einem Durchmesser von 10–15 nm, wodurch die Freisetzung von IL-1β und IL-18 erleichtert und die Pyroptose ausgeführt wird. Verwandte Referenzen: PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:33852854
• GSDME vermittelt als Reaktion auf TNF, Chemotherapeutika und Virusinfektionen den Wechsel von der Caspase-3-abhängigen Apoptose zur Pyroptose und fördert dadurch den entzündlichen Zelltod sowie die antitumorale Immunität. Verwandte Referenzen: PMID:27281216, PMID:28459430, PMID:32188940, PMID:28045099
• Als Tumorsuppressor wird GSDME durch von natürlichen Killerzellen freigesetztes Granzym B gespalten, wodurch die Pyroptose in den Ziel-Tumorzellen induziert und die antitumorale Immunantwort verstärkt wird. Verwandte Referenzen: PMID:21522185, PMID:31953257, PMID:32188940
• GSDME weist zudem eine bakterizide Aktivität auf und könnte eine Rolle bei der durch p53/TP53 vermittelten DNA-Schadensantwort spielen. Verwandte Referenzen: PMID:27281216, PMID:16897187
• Es wird in zahlreichen Geweben exprimiert, mit der höchsten Expression in der Plazenta und der Cochlea, was mit seiner Verbindung zu Hörverlust und schwangerschaftsbezogenen Pathologien übereinstimmt. Verwandte Referenzen: PMID:9771715
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Palmitoylierung und die Bildung von Isopeptidbindungen; alternatives Spleißen erzeugt Isoformen mit unterschiedlichen Molekulargewichten.
• Das Protein in voller Länge hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von etwa 55 kDa, während alternatives Spleißen und Spaltung Fragmente von etwa 11 kDa und 35 kDa erzeugen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 245–344, die innerhalb der N-terminalen Region von GSDME liegen. Diese Region ist für die Porenbildung entscheidend und in den gespaltenen aktiven Fragmenten konserviert.
• Bei der Durchführung eines Western Blots (WB) ist zu berücksichtigen, dass aufgrund von alternativem Spleißen und proteolytischer Prozessierung mehrere Banden bei etwa 11 kDa, 35 kDa und 55 kDa beobachtet werden können. Die Identifizierung der Banden sollte mit geeigneten Kontrollen validiert werden.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) ist sicherzustellen, dass die Bedingungen für die Antigenrückgewinnung zur Detektion von membranlokalisiertem und zytosolischem GSDME in formalinfixierten, paraffineingebetteten Geweben optimiert sind.
• Bei Anwendungen in der Immunpräzipitation (IP) und im ELISA bietet die monoklonale Beschaffenheit dieses Antikörpers eine hohe Spezifität. Eine Kreuzreaktivität mit anderen Mitgliedern der Gasdermin-Familie sollte jedoch mithilfe geeigneter Knockout- oder siRNA-Kontrollen ausgeschlossen werden.

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