[KO-validiert] Anti-CDK4-Kaninchen-Monoklonalantikörper für WB, IP, IHC-P, ELISA - P11802

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CDK4-Funktion und Lokalisierung

• Cyclin-abhängige Kinase 4 (CDK4) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase und ein Schlüsselregulator des Zellzyklus-Übergangs G1/S. Sie bildet Komplexe mit D-Typ-Cyclinen, um Retinoblastom (RB)-Familienproteine zu phosphorylieren, was E2F-Transkriptionsfaktoren freisetzt und den Zellzyklusfortschritt fördert.
• Im Gegensatz zu einigen anderen CDKs ist CDK4 relativ spezifisch für die G1-Phase, wo es RB1 früh in G1 hypophosphoryliert und so die anschließende Hyperphosphorylierung durch Cyclin E-CDK2-Komplexe ermöglicht.
• CDK4 ist im Zytoplasma, Zellkern und der Kernmembran lokalisiert, und seine Kern-Translokation wird durch den ternären Komplex Cyclin D/CDK4/CDKN1B reguliert.
• Alternatives Spleißen von CDK4 erzeugt mehrere Isoformen, und posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung und Phosphorylierung, die seine Aktivität und Stabilität modulieren.
• Neben RB-Proteinen phosphoryliert CDK4 SMAD3 in einer zellzyklusabhängigen Weise und unterdrückt dessen transkriptionelle Aktivität, wodurch TGF-β-Signalgebung mit der Zellzykluskontrolle verknüpft wird.
• CDK4 integriert verschiedene mitogene und antimitogene Signale und ist somit ein kritischer Knotenpunkt in der Proliferationskontrolle; seine Fehlregulation wird häufig bei Krebs beobachtet, und es ist ein bekannter Krankheitsvarianten-Lokus.
• Mit CDK4 assoziierte Schlüsselwörter umfassen ATP-Bindung, Nukleotidbindung, Transferase, Phosphoprotein und Referenzproteom, was seine enzymatischen und regulatorischen Rollen unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen für diesen Antikörper umfasst ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 204–303 von humanem CDK4 entspricht, das in der C-terminalen Region liegt. Der Antikörper erkennt daher voraussichtlich das vollständige CDK4 und kann auch C-terminale Fragmente nachweisen, falls vorhanden.
• Für Western Blotting wird ein spezifisches Band bei etwa 34 kDa erwartet, was dem vorhergesagten Molekulargewicht von CDK4 entspricht. Geringfügige Abweichungen im beobachteten Molekulargewicht können aufgrund posttranslationaler Modifikationen oder Isoformen-Expression auftreten.
• Die Knockout-Validierung liefert einen starken Nachweis der Spezifität. Als bewährte Praxis sollte die Verwendung eines CDK4-Knockout-Zelllysats als Negativkontrolle in Betracht gezogen werden, um die Bandenidentität in Ihrem experimentellen System zu bestätigen.
• Bei der Immunpräzipitation sollten native Lysebedingungen verwendet werden, um Protein-Protein-Interaktionen zu erhalten, wenn CDK4-Komplexe untersucht werden. Der kaninchenmonoklonale Ursprung des Antikörpers gewährleistet oft hohe Affinität und Chargenkonstanz.
• Für Immunhistochemie (Paraffin)-Experimente kann eine Antigen-Demaskierung erforderlich sein; eine Optimierung des Demaskierungspuffers und -protokolls wird für jeden Gewebetyp empfohlen.
• Obwohl der Antikörper für mehrere Spezies (Human, Maus, Ratte, Affe) validiert ist, sollte die Kreuzreaktivität aufgrund potenzieller Sequenzvariationen immer in Ihrer spezifischen Probe verifiziert werden.

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