KO-validierter Anti-Caspase-9 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P55211

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Caspase-9-Funktion und Lokalisierung

• Caspase-9 ist ein Mitglied der Cystein-Asparaginsäure-Protease (Caspase)-Familie, das als Schlüssel-Initiator-Caspase im intrinsischen apoptotischen Weg fungiert. Es wird durch das CASP9-Gen (GeneID: 842) kodiert und ist auch als apoptotische Protease Mch-6, APAF-3 und ICE-LAP6 bekannt.
• Nach Bindung an Apaf-1 bildet Caspase-9 das Apoptosom und wird aktiviert. Anschließend spaltet und aktiviert es nachgeschaltete Effektor-Caspasen, hauptsächlich Caspase-3 und Caspase-7, um die Apoptose auszuführen.
• Caspase-9 fördert DNA-Schaden-induzierte Apoptose auf ABL1/c-Abl-abhängige Weise. Es spaltet auch Poly(ADP-Ribose)-Polymerase (PARP) und BIRC6 proteolytisch. Die Spaltung von BIRC6 erfolgt nach Hemmung der BIRC6-Caspase-Bindung durch DIABLO/SMAC. Verwandte Referenzen: PMID:36758105 PMID:36758106
• Eine alternativ gespleißte Isoform (Isoform 2) fehlt katalytische Aktivität und wirkt als dominant-negativer Inhibitor von Caspase-9, was einen regulatorischen Mechanismus bietet.
• Die Gewebeexpression ist ubiquitär, mit höchsten Werten im Herzen (speziell in Myozyten), moderater Expression in Leber, Skelettmuskel und Bauchspeicheldrüse und niedrigen Werten in anderen Geweben.
• Als Zymogen benötigt Caspase-9 proteolytische Spaltung zur Aktivierung. Es wird weiter durch Phosphorylierung und Ubiquitylierung reguliert. Das Protein wird als Thiolprotease klassifiziert und seine 3D-Struktur wurde aufgeklärt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das zur Herstellung dieses Antikörpers verwendete Immunogen umfasst die Aminosäuren 139–416, die die katalytische Domäne enthalten. Daher kann der Antikörper sowohl die vollständige Proform (~46 kDa) als auch gespaltene aktive Fragmente erkennen. Berücksichtigen Sie geeignete Kontrollen bei der Bewertung der Caspase-Aktivierung.
• Für Western Blotting ist in unbehandelten Proben ein primäres Band nahe 46 kDa zu erwarten; zusätzliche kleinere Bänder können nach Induktion der Apoptose auftreten. Validieren Sie das spezifische Muster in Ihrem Modellsystem.
• Dieser Antikörper wurde KO-validiert, was auf zuverlässige Spezifität für Caspase-9 in Human-, Maus- und Rattenproben hinweist. Er eignet sich zum Nachweis endogener Spiegel.
• In IF/ICC-Experimenten ist Caspase-9 hauptsächlich im Zytoplasma lokalisiert, kann aber unter bestimmten apoptotischen Bedingungen im Zellkern beobachtet werden. Optimieren Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle entsprechend.
• Für ELISA-Anwendungen bewerten Sie diesen Antikörper als Teil eines Matched Pair mit anderen Anti-Caspase-9-Klonen, um optimale Sensitivität und Spezifität zu erreichen.

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