[KO validiert] Anti-Caspase-8 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q14790

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Caspase-8-Funktion und -Lokalisierung

• Caspase-8 (auch bezeichnet als FLICE, MACH, MCH5) ist eine 55 kDa Initiator-Caspase der Familie der Cystein-Asparaginsäure-Proteasen, die in mehreren Isoformen durch alternatives Spleißen produziert wird; die volle Längen-Isoform 1 ist katalytisch aktiv, während kürzere Isoformen als dominant-negative Inhibitoren wirken können.
• Als Schlüsselinitiator der extrinsischen Apoptose wird Caspase-8 über den Adaptor FADD in Todesrezeptorkomplexe (DISC) rekrutiert, sobald FAS oder TNFRSF1A stimuliert werden, was zu seiner Dimerisierung, autokatalytischen Spaltung und anschließenden Aktivierung von downstream-Effektor-Caspasen (CASP3/7) und BID führt, um den Zelltod auszuführen. Verwandte Referenzen: PMID:8681376, PMID:8681377, PMID:9184224
• Darüber hinaus reguliert Caspase-8 die Nekroptose negativ, indem es RIPK1 an Asp-324 spaltet, was die Kinaseaktivität von RIPK1 hemmt und TNF-induzierte nekroptotische und entzündliche Signalwege verhindert. Verwandte Referenzen: PMID:31827280, PMID:31827281
• Caspase-8 vermittelt auch Pyroptose durch Spaltung und Aktivierung von Gasdermin-C (GSDMC) und Gasdermin-D (GSDMD), wodurch ihre N-terminalen porenbildenden Domänen freigesetzt werden, die zum Membranriss und zum entzündlichen Zelltod führen. Verwandte Referenzen: PMID:32929201, PMID:34012073
• Es lokalisiert sich vorwiegend im Zytoplasma, kann aber auch im Kern und an Lamellipodien gefunden werden; Phosphorylierung an Tyr-380, unabhängig von seiner proteolytischen Aktivität, fördert die Zellmigration. Verwandte Referenzen: PMID:18216014, PMID:27109099
• Caspase-8 ist breit exprimiert, mit den höchsten mRNA-Spiegeln in peripheren Blutzellen, Milz, Thymus und Leber und sehr niedriger Expression im Gehirn, Hoden und Skelettmuskel.
• Zusätzlich spaltet Caspase-8 PARP1 und PARP2 während der Apoptose und kann an Granzyme B-vermittelten zytotoxischen Zelltodwegen teilnehmen. Verwandte Referenzen: PMID:8681376, PMID:8755496

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Resten 200-300 innerhalb der katalytischen Domäne von menschlichem Caspase-8; diese Region ist im全长-Proenzym und in der großen katalytischen Untereinheit vorhanden, sodass der Antikörper sowohl unprozessierte und gespaltene Formen detektieren kann.
• Führen Sie für Western Blot SDS-PAGE unter reduzierenden Bedingungen durch; rechnen Sie mit einem Hauptband bei ~55 kDa (volle Länge) und, abhängig von der zellulären Behandlung, mit kleineren Bändern, die die aktiven p18/p10-Fragmente darstellen. Fügen Sie immer Molekulargewichtsmarker hinzu.
• Dieser Antikörper ist angeblich KO-validiert; erwägen Sie die Verwendung von Caspase-8-Knockout-Zelllysaten als negative Kontrolle, um die Bandspezifität in Ihrem experimentellen System zu bestätigen.
• Führen Sie für ELISA-Anwendungen eine Schachbrett-Titration durch, um optimale Beschichtungsantigen- und Antikörperkonzentrationen zu ermitteln; validieren Sie gegen einen bekannten Standard, falls verfügbar.
• Wenn Sie die Caspase-8-Aktivierung untersuchen, behandeln Sie Zellen mit geeigneten Induktoren (z. B. TNF-α + Cycloheximid für Apoptose oder TNF-α + zVAD + Smac-Mimetikum für Nekroptose) und überwachen Sie die Spaltungskinetik, um zwischen Todesmodalitäten zu unterscheiden.
• Eine Kreuzreaktivität wird nur für den Menschen berichtet; wenn Sie auf andere Spezies anwenden, richten Sie die immunogene Peptidsequenz mit dem Caspase-8 des Zielorganismus aus, um die potenzielle Reaktivität zu bewerten.

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