KO validierter Anti-ATG4D Kaninchen polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q86TL0

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ATG4D

• ATG4D (auch bekannt als APG4D, AUTL4, Autophagin-4 oder HsAPG4D) ist ein Mitglied der ATG4-Cysteinasproteinfamilie, die eine zentrale Rolle bei der Autophagie spielt.
• Proteolytische Aktivierung: ATG4D spaltet die C-terminale Aminosäure von ATG8-Familienproteinen, einschließlich MAP1LC3 und GABARAPL2, um ein Glycin freizulegen, das für die Konjugation mit Phosphatidylethanolamin (PE) und die anschließende Membraninsertion essenziell ist (PubMed:21177865). Zugehörige Referenzen: PMID:21177865
• Delipidierungsaktivität: Zusätzlich zur Aktivierung katalysiert ATG4D die Delipidierung von PE-konjugierten ATG8-Proteinen während der Makroautophagie und entfernt Phosphatidylserin (PS)-Konjugate bei der nicht-kanonischen Autophagie (PubMed:29458288, PubMed:33909989). Zugehörige Referenzen: PMID:29458288 PMID:33909989
• Spezialisierung auf Delipidierung: Im Vergleich zu ATG4A, ATG4B und ATG4C ist ATG4D das wichtigste Delipidierungsenzym für ATG8-Familienproteine mit vergleichsweise schwacher proteolytischer Aktivierungsaktivität.
• Rolle bei der Mitophagie: ATG4D fördert die Expansion des Phagophors während der Mitophagie durch Regulierung des ATG9A-Transports zu Mitochondrien und erleichtert Kontakte zwischen Endoplasmatischem Retikulum und Phagophor – unabhängig von seiner Proteasefunktion (PubMed:33773106). Zugehörige Referenzen: PMID:33773106
• Verbindung zur Apoptose: Der mitochondriale Import von ATG4D unter zellulärem Stress oder Differenzierung verbindet mitochondriale Dysfunktion mit Apoptose und beeinflusst die mitochondriale Physiologie, ROS und die Zellviabilität.
• Subzelluläre Lokalisation: ATG4D befindet sich im Zytoplasma und kann in die mitochondriale Matrix translozieren.
• Gewebeexpression: Es ist breit im Hoden exprimiert und wird mit Prozessen wie Apoptose, Autophagie und thiolproteasevermitteltem Proteintransport in Verbindung gebracht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (Aminosäuren 1–230 von humanem ATG4D) deckt die N-terminale katalytische Domäne ab, die über Mensch, Maus und Ratte hinweg hochkonserviert ist – was mit der angegebenen Kreuzreaktivität übereinstimmt. Erwägen Sie die Verwendung von spezies-spezifischen Kontrolllysaten zur Bestätigung der Reaktivität in Ihrem Assay.
• Für Western Blot (WB)-Anwendungen beträgt das erwartete Molekulargewicht ungefähr 53 kDa. Da die ATG4D-Expression je nach Zelltyp und Stressbedingungen variieren kann, empfehlen wir, den Antikörper in Ihrer spezifischen Probenmatrix zu validieren.
• Der Antikörper wurde in bestimmten Zelllinien Knockout (KO) validiert, was einen starken Beweis für seine Spezifität liefert. Dennoch ist die Durchführung Ihrer eigenen Validierung mit geeigneten Positiv- und Negativkontrollen ratsam.
• Im ELISA kann die Verwendung des rekombinanten Immunogens als Beschichtungsantigen oder Standard helfen, die Assaybedingungen zu optimieren. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Arbeitskonzentration für Ihr Plattenformat zu bestimmen.

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