[KO Validiert] Anti-AIF Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF, IHC, ELISA - O95831

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: AIF-Funktion und -Lokalisierung

• AIF, auch bekannt als programmierter Zelltod-Protein 8 (PDCD8), wird beim Menschen durch das AIFM1-Gen kodiert. Aufgrund alternativen Spleißens existieren mehrere Isoformen, einschließlich einer pro-apoptotischen Isoform und hirnspezifischer Varianten.
• AIF fungiert als NADH-Oxidoreduktase im normalen mitochondrialen Stoffwechsel und als Schlüsselregulator der caspase-unabhängigen Apoptose. Nach apoptotischer Stimulation wird es aus dem mitochondrialen Intermembranraum in das Zytosol und den Zellkern freigesetzt, wo es die Chromatinkondensation und großangelegte DNA-Fragmentierung (Parthanatos) auslöst. Verwandte Referenzen: PMID:17094969 PMID:20362274 PMID:23217327
• Im Zellkern bindet AIF sequenzunabhängig an DNA und induziert eine caspase-unabhängige chromosomale DNA-Fragmentierung, ein Kennzeichen des Parthanatos. Verwandte Referenzen: PMID:27178839 PMID:20362274
• AIF interagiert mit EIF3G, um die Proteinsynthese durch Blockierung des EIF3-Translationsmechanismus zu hemmen, und aktiviert Caspase-7, wodurch die Apoptose verstärkt wird. Verwandte Referenzen: PMID:17094969
• AIF spielt eine kritische Rolle bei der caspase-unabhängigen, pyknotischen Zelltod, der durch Wasserstoffperoxid-Exposition induziert wird. Verwandte Referenzen: PMID:19418225
• Bei der mitochondrialen Homöostase nimmt AIF an der Biogenese der Atmungskette teil, indem es mit CHCHD4 interagiert und dessen mitochondrialen Import steuert. Verwandte Referenzen: PMID:26004228
• AIF ist unter normalen Bedingungen vorwiegend im mitochondrialen Intermembranraum und in der Innenmembran lokalisiert. Während der Apoptose wandert es in das Zytoplasma, den perinukleären Bereich und den Zellkern.
• AIF wird in allen getesteten menschlichen Geweben exprimiert, außer im Gehirn (Isoform 5). Es wird in Muskel, Hautfibroblasten und Osteoblasten nachgewiesen. Bemerkenswert ist, dass Isoform 5 in verschiedenen menschlichen Krebsarten häufig herunterreguliert ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht dem C-terminalen Bereich (aa 334-613) von humanem AIF, was die Erkennung mehrerer Spleißvarianten ermöglichen könnte. Für Anwendungen wie Western Blot (WB) ist ein Band bei ca. 67 kDa zu erwarten. Erwägen Sie die Verwendung von Knockout (KO)-validierten Lysaten, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) beachten Sie, dass AIF in gesunden Zellen vorwiegend in den Mitochondrien lokalisiert ist, aber nach Einleitung der Apoptose in den Zellkern wandert. Die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen sollten optimiert werden, um sowohl mitochondriale als auch nukleäre Färbungen zu erhalten.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) kann eine Antigenrückgewinnung notwendig sein, um Epitope freizulegen; testen Sie Standardprotokolle auf Citrat- oder EDTA-Basis. Validieren Sie in positiven Kontrollgeweben (z. B. Muskel, Haut), die AIF exprimieren.
• Für ELISA ermöglicht die polyklonale Natur die Verwendung sowohl als Fang- als auch als Nachweisantikörper in Sandwich-Formaten, aber die Paarung mit einem monoklonalen Antikörper kann den Hintergrund verringern.

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