[KD validiert] Anti-YTHDC1 monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IP, ELISA - Q96MU7

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von YTHDC1

• Das YTH-Domänen-enthaltende Protein 1 (YTHDC1), auch bekannt als YT521-B oder Spleißfaktor YT521, ist ein Mitglied der YTH-Domänen-Familie RNA-bindender Proteine, die spezifisch N6-Methyladenosin (m6A)-modifizierte RNAs erkennen. Verwandte Referenzen: PMID:25242552, PMID:26318451, PMID:26876937

• YTHDC1 fungiert als zentraler Regulator des alternativen Spleißens, wo es an m6A-haltige Prä-mRNAs bindet und Spleißfaktoren rekrutiert. Die Interaktion mit SRSF3 fördert die Exon-Inklusion, während die Konkurrenz mit SRSF10 zur Hemmung des Exon-Skipping führt. Verwandte Referenzen: PMID:26876937

• Es spielt auch eine Rolle beim Kernexport von m6A-modifizierten mRNAs durch die gleichzeitige Bindung an SRSF3 und den Kernexportfaktor NXF1, was den Transport von mRNA aus dem Kern in das Zytoplasma erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:28984244

• YTHDC1 ist an der Regulation der X-Chromosom-Inaktivierung beteiligt, indem es m6A auf Xist-RNA erkennt und dessen transkriptionelle Repressionsaktivität fördert, wodurch es zur Stillelegung eines X-Chromosoms in weiblichen Säugetieren beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:27602518

• Über RNA hinaus kann YTHDC1 auch an m6A-haltige einzelsträngige DNA binden, was auf breitere Rollen in nukleinsäurevermittelten Prozessen hindeutet. Verwandte Referenzen: PMID:32663306

• Subzellulär ist YTHDC1 überwiegend im Kern lokalisiert und angereichert in Kernspeckeln, den Speicher- und Modifikationsorten für Spleißfaktoren – was mit seiner Rolle bei der Prä-mRNA-Verarbeitung übereinstimmt.

• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung und Ubiquitinierung (Isopeptidbindungsbildung), die seine Aktivität und Stabilität regulieren können. Das Protein hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von 84,7 kDa, mit einer beobachteten Bande bei etwa 85 kDa im Western Blot.

• YTHDC1 ist essenziell für die Keimbahnentwicklung; Studien an Modellorganismen zeigen, dass es für die Spermatogonieentwicklung bei Männchen und das Oozytenwachstum bei Weibchen benötigt wird, wahrscheinlich durch seine Funktionen beim alternativen Spleißen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den 71 N-terminalen Aminosäuren von humanem YTHDC1. Da das Epitop in einer Region liegt, die von mehreren Spleißvarianten geteilt wird, kann der Antikörper mehrere Isoformen erkennen; eine Validierung in der entsprechenden Zelllinie oder Gewebe wird empfohlen.
• Die Western Blot-Analyse mit diesem Antikörper zeigt erwartungsgemäß eine Bande in der Nähe von 85 kDa. Lysate von menschlichen, Maus- oder Rattenzellen können verwendet werden, aber das genaue Bandenmuster sollte unter den verwendeten experimentellen Bedingungen bestätigt werden.
• Für die Immunhistochemie (IHC‑P) wird ein überwiegend nukleäres Signal erwartet, das oft in Kernspeckeln konzentriert ist. Für jeden Gewebetyp kann eine Optimierung der Antigen-Retrieval und der Antikörper-Verdünnung erforderlich sein.
• Der Antikörper ist für die Immunpräzipitation (IP) von endogenem YTHDC1 geeignet; die Ko-Immunpräzipitation von Interaktionspartnern wie SRSF3 kann mit geeigneten Kontrollen untersucht werden.
• ELISA-Anwendungen können mit diesem Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz entwickelt werden; für Sandwich-ELISA-Formate ist die Paarung mit einem polyklonalen Detektor oder einem passenden Antikörperpaar empfehlenswert.
• Die Knockdown (KD)-Validierung bestätigt, dass das Signal nach YTHDC1-Depletion reduziert wird, was die Spezifität für die Zielidentifizierung in Gen-Stilllegungsstudien unterstützt.

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