KD Validiertes Kaninchen-monoklonaler Anti-TFEB-Antikörper für WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P19484

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von TFEB

• TFEB (Transkriptionsfaktor EB), auch bekannt als Klasse E basische Helix-Schleife-Helix-Protein 35 (bHLHe35), gehört zur MiT/TFE-Unterfamilie der basischen Helix-Schleife-Helix-Leucinzipper-(bHLH-Zip)-Transkriptionsfaktoren, zu der auch MITF und TFE3 gehören.
• Es fungiert als Hauptregulator der lysosomalen Biogenese und Autophagie, indem es an koordinierte lysosomale Expressions- und Regulations-(CLEAR)-Motive (5′-GTCACGTGAC-3′) in den Promotoren von lysosomalen und autophagischen Genen bindet. Zugehörige Referenzen: PMID:19556463, PMID:22692423
• Die TFEB-Aktivität wird streng durch nährstoffsensitive Phosphorylierung kontrolliert: unter Fütterungsbedingungen hält die mTOR-vermittelte Phosphorylierung an mehreren Serinresten TFEB im Zytosol zurück; Hunger oder lysosomaler Stress hemmt mTOR, was zu einer schnellen Dephosphorylierung und nukleären Translokation führt. Zugehörige Referenzen: PMID:21617040, PMID:22343943, PMID:22576015
• Im Kern dimerisiert TFEB mit sich selbst oder anderen MiT/TFE-Mitgliedern, um die Transkription von Zielgenen zu aktivieren, die an Autophagie, Lipidstoffwechsel, Energiehomöostase und Immunabwehr beteiligt sind. Zugehörige Referenzen: PMID:1748288, PMID:29146937
• Darüber hinaus spielt TFEB eine Rolle bei der adaptiven Immunität durch Regulation der CD40L-Expression in T-Zellen und bei der antibakteriellen angeborenen Immunität durch Itaconat-vermittelte Alkylierung, die seine nukleäre Lokalisation und lysosomale Biogenese fördert. Zugehörige Referenzen: PMID:35662396
• Die subzelluläre Lokalisation ist dynamisch: bei Phosphorylierung ist es hauptsächlich zytoplasmatisch, nach Aktivierung transloziert es in den Kern; es kann auch mit der Lysosomenmembran assoziiert sein.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 50–173 von humanem TFEB (NP_009093.1). Diese Region liegt innerhalb der N-terminalen Transaktivierungsdomäne, die bei Mensch, Maus und Ratte relativ konserviert ist, was die angegebene Kreuzreaktivität unterstützt. Für nicht aufgeführte Spezies wird eine Sequenzabgleichung empfohlen.
• Bei Western Blot kann TFEB aufgrund unterschiedlicher Phosphorylierung oder alternativen Spleißens als Doublett zwischen 44 und 53 kDa erscheinen; die Verwendung frischer Phosphataseinhibitoren im Lysepuffer kann helfen, Phosphoisoformen zu erhalten. Der Antikörper wurde auf Knockdown-Spezifität validiert (KD Validated).
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollten die Antigen-Retrieval-Bedingungen für Ihren Gewebetyp optimiert werden. Abhängig vom Aktivierungsstatus von TFEB kann eine nukleäre und zytoplasmatische Färbung beobachtet werden.
• Für ChIP stellen Sie sicher, dass die Quervernetzungs- und Scherbedingungen für Ihren Zelltyp optimiert sind; der Antikörper sollte Promotorregionen mit CLEAR- oder E-Box-Sequenzen effizient anreichern.
• Führen Sie bei der Etablierung von Assays geeignete Positiv- und Negativkontrollen durch (z. B. TFEB-Knockout-Lysate, bekannte Zielgenloci).

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