KD validierter monoklonaler Kaninchen-Antikörper gegen Sharpin für WB, IF/ICC, ELISA – Q9H0F6

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Sharpin

• Sharpin (Shank-assoziiertes RH-Domäne-interagierendes Protein), auch bekannt als SIPL1 (Shank-interagierendes Protein-ähnliches 1), ist ein Bestandteil des linearen Ubiquitinketten-Assemblierungskomplexes (LUBAC). LUBAC bindet lineare Polyubiquitinketten kopf-an-schwanz an Substrate und spielt eine Schlüsselrolle bei der NF-κB-Aktivierung und Entzündungsregulation.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• Über LUBAC vermittelt Sharpin die lineare Ubiquitinierung von IKBKG (NEMO) und RIPK1, was für die kanonischen NF-κB- und JNK-Signalwege essenziell ist. Diese Modifikation beeinflusst TNF-induzierten Zelltod und verhindert so Entzündungen.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:21455173 PMID:21455180 PMID:21455181
• In der angeborenen Immunität bindet Sharpin-haltiges LUBAC lineare Polyubiquitinketten auf der Oberfläche von in das Zytosol eindringenden Bakterien, wodurch eine Ubiquitinhülle entsteht, die als „Fress-mich“-Signal für die Xenophagie dient und die NF-κB-Aktivierung fördert. LUBAC verlängert bereits vorhandenes Ubiquitin, statt die Ubiquitinierung zu initiieren.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:28481331
• Sharpin beteiligt sich zusammen mit der Deubiquitinase OTULIN an der Regulation des kanonischen Wnt-Signalwegs während der Angiogenese, indem es Ereignisse der linearen Ubiquitinierung moduliert.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:23708998
• Das Protein ist überwiegend im Zytoplasma und Zytosol lokalisiert und kommt auch an Synapsen vor – dies ist konsistent mit seinen Rollen bei der Signaltransduktion und neuronalen Funktion.
• Die Expression ist am höchsten in Skelettmuskel und Plazenta, niedrigere Werte finden sich in Gehirn, Herz, Dickdarm, Thymus, Milz, Niere, Leber, Dünndarm, Lunge und peripheren Blutleukozyten. Sharpin ist in verschiedenen Tumorgeweben hochreguliert, einschließlich Niere, Leber, Ovar und Pankreas.
• Sharpin enthält Zinkfinger-Domänen und ist ein Phosphoprotein, was auf eine Regulation durch posttranslationale Modifikationen hinweist. Es unterliegt alternativem Spleißen, wodurch mehrere Isoformen entstehen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein N-terminales Fragment (Aa 1–126) von menschlichem Sharpin hergestellt. Diese Region kann über bekannte Isoformen konserviert sein; falls anwendbar, sollten Sie die Isoformabdeckung überprüfen.
• Für den Western Blot (WB) ist eine Bande von etwa 40 kDa zu erwarten. Verwenden Sie positives Kontrolllysat wie HeLa oder HEK293, die Sharpin exprimieren.
• Bei Immunfluoreszenz/Immunozytochemie (IF/ICC) ist hauptsächlich eine zytoplasmatische und möglicherweise synaptische Färbung zu erwarten. Optimieren Sie Fixierung und Permeabilisierung für den von Ihnen untersuchten Zelltyp.
• Die ELISA-Anwendung ist möglich; führen Sie eine geeignete Antikörper-Titration durch und verwenden Sie rekombinantes Sharpin-Protein als Standard.
• Da Sharpin an der TNF-Signalgebung beteiligt ist, kann eine Stimulation mit TNF-α seine Lokalisation oder Komplexbildung beeinflussen – dies kann mit diesem Antikörper untersucht werden.

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