Human IgE Rabbit mAb für WB, FC, ELISA - P01854

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: IgE-Funktion und -Lokalisierung

• IgE ist eine Immunglobulin-schwere-Ketten-Konstante-Epsilon-Region, die den IgE-Isotyp definiert. Es ist ein Glykoprotein mit intra- und interkettigen Disulfidbrücken.
• Die Antigen-Bindungsspezifität von IgE wird durch die variablen Domänen bestimmt, die durch V(D)J-Rekombination und somatische Hypermutation erzeugt werden, was eine Hochaffinitäts-Erkennung ermöglicht. Verwandte Referenzen: PMID:17576170, PMID:20176268
• Sekretiertes IgE vermittelt allergische und anti-parasitäre Reaktionen durch Bindung an den Hochaffinitätsrezeptor FCER1A auf Mastzellen, Basophilen und Eosinophilen, was die Degranulation und die Freisetzung von Histamin, Leukotrienen und Zytokinen auslöst. Verwandte Referenzen: PMID:25629393, PMID:33840121, PMID:8114916, PMID:8551243
• IgE interagiert auch mit dem Niedrigaffinitätsrezeptor FCER2 auf Makrophagen, um die Abtötung von Parasiten zu stimulieren, und auf B-Zellen, um die Antigenpräsentation zu verstärken. Verwandte Referenzen: PMID:7544003, PMID:2167225
• Membrangebundenes IgE existiert als lange und kurze Isoformen und bildet den B-Zell-Rezeptor(BCR)-Komplex. Die Antigen-Vernetzung des BCR steuert das Überleben und die Differenzierung von IgE+ B-Zellen.
• Die IgE-Expression findet vorwiegend in B-Lymphozyten nach Stimulation mit IL-4 und CD40 statt, was sie mit Th2-Typ-Immunantworten verknüpft.
• Alternatives Spleißen des IGHE-Gens erzeugt sekretierte und zwei membrangebundene Isoformen, jeweils mit unterschiedlichen Signaleigenschaften.
• Dysregulierte IgE-Reaktionen tragen zu allergischen und anaphylaktischen Zuständen bei. Verwandte Referenzen: PMID:25629393, PMID:33840121, PMID:7544003

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 104-428 der konstanten Region von humanem IgE und deckt die CH2-CH4-Domänen ab. Dieses Design stellt sicher, dass die Fc-Region erkannt wird, die von sekretierten und membrangebundenen Isoformen geteilt wird.
• Für Western Blot (WB) sollten reduzierende Bedingungen in Betracht gezogen werden; das beobachtete Molekulargewicht kann wie angegeben ~47 kDa betragen, aber Glykosylierung kann die Bande verschieben oder einen Schmier erzeugen.
• In der Durchflusszytometrie (FC) eignet sich dieser Antikörper zum Nachweis von membrangebundem IgE auf B-Zellen oder von IgE, das von Fc-Rezeptoren auf Basophilen/Mastzellen gebunden wird; geeignete Isotyp-Kontrollen und Fc-Blockierungsschritte werden empfohlen.
• Für ELISA-Anwendungen kann dieser monoklonale Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz für die Gesamt-IgE-Quantifizierung dienen; optimieren Sie die Beschichtungskonzentration und kombinieren Sie ihn mit einem geeigneten polyklonalen oder monoklonalen Anti-IgE-Detektionsantikörper.
• Da die IgE-Konzentrationen in Serum/Plasma niedrig sind, sollten die Probenvorbereitung und die Assay-Empfindlichkeit mit Standardkurven unter Verwendung von gereinigtem IgE-Protein überprüft werden.

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