Formyl-Histon H2B-K120 Kaninchen-monoklonaler Antikörper (P62807/Q16778) für WB, IHC-P, ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Formyl-Histon H2B

Histon H2B ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, wo es DNA verpackt und zu Chromatin kompaktiert und daher eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität spielt. Die dynamische Zugänglichkeit von DNA wird durch den "Histon-Code" gesteuert, eine komplexe Menge posttranslationaler Modifikationen (PTM) an Histonen. Verwandte Referenzen: UniProt P62807, UniProt Q16778

Menschliches Histon H2B durchläuft umfangreiche PTMs, darunter Acetylierung (z. B. an K6, K12, K16, K21), Crotonylierung (K12), Phosphorylierung (S15) und Formylierung an K120. Die Formylierung an K120 ist eine neuere Modifikation, die die Chromatinarchitektur und Genexpression subtil beeinflussen kann, obwohl ihre volle biologische Bedeutung noch intensiv erforscht wird. Verwandte Referenzen: PMID:16283522, PMID:16627869, PMID:21925322, PMID:12757711

Zusätzlich zu seiner strukturellen Rolle weist H2B eine breite antibakterielle Aktivität auf und kann zur antimikrobiellen Barriere des Kolonepithels und zur bakteriziden Wirkung des Fruchtwassers beitragen. Verwandte Referenzen: UniProt P62807, UniProt Q16778

H2B lokalisiert sich überwiegend im Zellkern und assoziiert mit Chromosomen. Das menschliche Genom kodiert mehrere H2B-Varianten, darunter H2B Typ 1-C/E/F/G/I (P62807) und H2B Typ 2-E (Q16778), die hochkonservierte Sequenzen aufweisen. Das Immunogenpeptid umfasst einen Bereich, der über diese Isoformen hinweg konserviert ist, was die vorhersagte breite Kreuzreaktivität unterstützt. Verwandte Referenzen: UniProt P62807, UniProt Q16778

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das dem menschlichen Histon H2B mit Formylierung an Lysin 120 entspricht. Es wird erwartet, dass der Antikörper spezifisch Formyl-H2B-K120 erkennt; erwägen Sie die Verwendung eines nicht formylierten Peptids oder einer enzymatischen Deformylierung als Negativkontrolle zur Bestätigung der Spezifität.
• Für das Western Blotting (WB) ist eine Bande bei etwa 14 kDa zu erwarten. Verwenden Sie Kernextrakte oder histonangereicherte Präparate. Die Zugabe eines Niedermolekulargewichtsmarkers und einer Kontrollprobe (z. B. unbehandelt vs. mit Formylase-Inhibitor behandelt) wird empfohlen.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) kann eine Antigen-Retrieval erforderlich sein, um das nukleäre Epitop in formalinfesten paraffineingebetteten Schnitten freizulegen. Es sollte eine Kernfärbung beobachtet werden; validieren Sie mit geeigneten Gewebekontrollen.
• Für ELISA beschichten Sie das formylierte Peptid und verwenden Sie ein unmodifiziertes Peptid als Kontrolle, um die Bindungsspezifität zu bestimmen. Optimieren Sie die Beschichtungsbedingungen und die Antikörperverdünnung entsprechend der Probenmatrix.
• Aufgrund der hohen Sequenzidentität wird für den Antikörper eine Kreuzreaktivität mit humanem, Maus- und Ratten-H2B vorhersagt; dennoch wird eine Validierung im entsprechenden Spezies- und Probensystem empfohlen.
• Vermeiden Sie unspezifische Blockierungsmittel, die die niedermolekulare Modifikation maskieren könnten; bei Hintergrundbeobachtung können BSA-freie Blocker oder alternative Blockierungsstrategien in Betracht gezogen werden.

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