FITC Kaninchen anti-Human/Affe CD45 monoklonaler Antikörper für FC - P08575

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD45-Funktion und -Lokalisierung

• CD45, auch bekannt als PTPRC, ist eine rezeptortyrosin-Proteinphosphatase, die als Leukozyten-common-Antigen (L-CA oder T200) dient. Sie wirkt als positiver Regulator der T-Zell-Aktivierung über den Antigenrezeptor nach Bindung an DPP4 und ist für eine effektive T-Zell-Koaktivierung erforderlich. Verwandte Referenzen: PMID:35767951
• Die intrazelluläre Region beherbergt zwei Phosphatasedomänen: Die erste Domäne verfügt über enzymatische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität moduliert. CD45 dephosphoryliert wichtige Signalmoleküle wie SKAP1, FYN und LYN und stimmt damit die Schwellenwerte der T-Zell-Rezeptorsignalisierung fein ab.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen (1–8) mit variablen extrazellulären Domänen. In Thymozyten werden die Isoformen 1, 2, 3, 5 und 7 nachgewiesen, während die Isoformen 4, 6 und 8 fehlen, was auf eine streng regulierte Isoformexpression während der T-Zell-Entwicklung hinweist.
• Zur subzellulären Lokalisierung gehören die Zellmembran, Membran-Rafts und die immunologische Synapse, wo CD45 dynamisch mit antigenpräsentierenden Zellen interagiert, um die T-Zell-Aktivierung zu modulieren und die Autoreaktivität zu begrenzen.
• Als stark glycosyliertes und phosphoryliertes Protein zeigt CD45 eine scheinbare Molekulargewichtsspanne von 131–147 kDa im SDS-PAGE, was umfangreiche posttranslationale Modifikationen widerspiegelt, die seine Funktion und Isoformvielfalt beeinflussen.
• CD45 beteiligt sich auch an Wirt-Pathogen-Interaktionen: Es fungiert als Rezeptor für das humane Cytomegalievirus-Protein UL11, was zu einer Beeinträchtigung der T-Zell-Proliferation nach viralem Kontakt führt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Titrieren Sie für die Durchflusszytometrie den Antikörper, um die optimale Konzentration für Ihren spezifischen Zelltyp und Ihre Instrumentenkonfiguration zu ermitteln.
• Verwenden Sie humane PBMCs oder Cynomolgus-Lymphozytensuspensionen als positive Kontrollen; CD45 ist auf allen Leukozytensubsets stark exprimiert und bietet ein robustes Gating-Marker.
• Integrieren Sie dieses FITC-Konjugat in Multicolor-Panels zusammen mit Markern für T-Zellen, B-Zellen und myeloische Zellen, um eine umfassende Immunphänotypisierung zu ermöglichen.
• Stellen Sie sicher, dass das Zytometer mit einem 488-nm-Laser und geeigneten Filtern für die FITC-Detektion ausgestattet ist.
• Validieren Sie die Färbung mit einem geeigneten Isotyp-Kontrolle und schließen Sie eine Fc-Rezeptor-Blockierung ein, um unspezifische Bindungen zu minimieren.
• Beachten Sie, dass das Epitop auf der extrazellulären Domäne (aa 26–577) abgebildet wird, die über mehrere CD45-Isoformen hinweg geteilt wird, was eine breite Leukozyten-Erkennung unterstützt.

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