ESRα Kaninchen mAb für WB - P03372

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Östrogenrezeptors

• Der Östrogenrezeptor-alpha (ERα), auch bekannt als ER-alpha, Estradiolrezeptor und Kernrezeptor-Unterfamilie 3 Gruppe A Mitglied 1 (NR3A1), wird vom ESR1-Gen kodiert und gehört zur Superfamilie der nukleären Hormonrezeptoren.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, von denen einige funktionelle Domänen fehlen. Diese können die transkriptionelle Aktivität des Volllängenrezeptors durch kompetitive Liganden- oder DNA-Bindung und Heterodimerisierung modulieren. Verwandte Referenzen: PMID:10970861
• Nach Bindung von 17β-Estradiol unterliegt ERα einer Konformationsänderung, die die Homodimerisierung und die direkte Bindung an Östrogen-Response-Elemente (ERE) in den Promotoren der Zielgene fördert, oder er assoziiert mit anderen Transkriptionsfaktoren (z. B. AP-1, Sp1, NF-κB), um eine ERE-unabhängige Transkription zu regulieren.
• ERα vermittelt auch eine schnelle, membraninitiierte Östrogensignalisierung, aktiviert verschiedene Kinase-Kaskaden und ist für die MTA1-vermittelte transkriptionelle Regulation von BRCA1 und BCAS3 unerlässlich. Verwandte Referenzen: PMID:17922032
• Beteiligt an der Aktivierung von NOS3 und der Produktion von endothelialem Stickstoffmonoxid, was zur vaskulären Homöostase beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:21937726
• Lokalisiert vorwiegend im Zellkern, findet sich aber auch im Zytoplasma, in der Zellmembran und im Golgi-Apparat; die subzelluläre Verteilung wird dynamisch durch Ligandenbindung und posttranslationale Modifikationen reguliert.
• Zum posttranslationalen Modifikationen gehören Phosphorylierung, Palmitoylierung, Methylierung, Ubiquitinierung und Glykosylierung, die die Stabilität, Lokalisierung und transkriptionelle Aktivität des Rezeptors beeinflussen.
• Weit verbreitet in vielen Geweben exprimiert, aber bemerkenswerterweise nicht in der Hypophyse vorhanden. Verwandte Referenzen: PMID:10970861

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Resten 495–595 im C-terminalen Bereich des menschlichen ESRα. Dieser Bereich kann in mehreren Isoformen vorhanden sein; erwägen Sie jedoch die Überprüfung der Isoformspezifität unter Verwendung von Zelllinien, die unterschiedliche Spleißvarianten exprimieren.
• Für Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 66 kDa; verwenden Sie vorgefärbte Marker zur Größenbestätigung und optimieren Sie die Blockierungsbedingungen, um unspezifische Bindungen zu reduzieren.
• Bei der Durchführung von Immunopräzipitation (IP) bereiten Sie frische Lysate mit geeigneten Protease- und Phosphataseinhibitoren vor, um die Stabilität von ERα zu erhalten.
• Für Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) optimieren Sie sorgfältig die Vernetzungs- und Sonifikationsparameter, da die Chromatin-Interaktionen von ERα transient und von der Ligandenstimulation abhängig sein können.
• Bei der Durchflusszytometrie (intrazelluläre Färbung) fügen Sie einen Isotyp-Kontrolle ein und validieren Sie Permeabilisierungsprotokolle, die für nukleäre Antigene geeignet sind.
• Für ELISA titrieren Sie den Antikörper als Erfassungs- oder Nachweisreagenz gegen rekombinantes ERα-Protein, um optimale Arbeitskonzentrationen zu ermitteln.
• Alle Anwendungen wurden mit menschlichen Proben validiert; die Reaktivität mit anderen Spezies sollte experimentell bestätigt werden.

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