EGF-Rezeptor (E746-A750del-spezifisch) Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, ELISA – P00533

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des EGF-Rezeptors (EGFR)

• EGFR ist eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die an mehrere Liganden der EGF-Familie bindet (z. B. EGF, TGFA, AREG, Epigen, BTC, EREG, HBEGF). Die Ligandenbindung löst Homo-/Heterodimerisierung, Autophosphorylierung und die Aktivierung nachgeschalteter Signalwege aus, darunter RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STATs und NF‑kappa‑B. Dieser Antikörper ist spezifisch für die Deletionsmutante E746‑A750, die häufig bei nicht-kleinzelligem Lungenkrebs vorkommt. Verwandte Referenzen: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960 PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029 PMID:11116146 PMID:11602604 PMID:11483589 PMID:20462955
• Isoform 2 von EGFR kann als Antagonist der EGF-Wirkung wirken, während die kanonische Isoform 1 der vorherrschende Signalrezeptor ist.
• EGFR ist an der Zellmembran lokalisiert, befindet sich aber auch im Endoplasmatischen Retikulum, Golgi-Apparat, Zellkern, Endosomen und kann sezerniert werden.
• Das Protein ist umfangreich posttranslational modifiziert, einschließlich Phosphorylierung, Glykosylierung, Hydroxylierung, Palmitoylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und seinen Transport regulieren.
• Es ist ubiquitä exprimiert, wobei Isoform 2 zusätzlich bei Ovarialkarzinomen vorkommt.
• EGFR dient außerdem als Wirtszellrezeptor für den Eintritt des Hepatitis-C-Virus (HCV) und vermittelt die Bildung des CD81-CLDN1-Komplexes sowie die Membranfusion.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die Deletion E746-A750 umfasst, was bedeutet, dass der Antikörper dafür entwickelt wurde, selektiv das mutante Epitop zu erkennen. Experimentatoren sollten die Spezifität mit Wildtyp-EGFR-exprimierenden Zellen als Negativkontrolle bestätigen.
• Für Western Blot wird die Verwendung von Proteinlysaten aus menschlichen Krebszelllinien empfohlen, die bekanntermaßen die EGFR E746‑A750del-Mutation tragen (z. B. HCC827, H1975), oder von rekombinantem mutiertem EGFR-Protein.
• Für ELISA wird die Beschichtung mit rekombinantem E746‑A750del EGFR-Protein empfohlen. Beachten Sie, dass eine Kreuzreaktivität mit Wildtyp-EGFR auftreten kann; daher sind eine geeignete Blockierung und die Optimierung der Verdünnung erforderlich.
• Die optimale Arbeitskonzentration für WB und ELISA sollte empirisch bestimmt werden; typische Anfangsverdünnungen für polyklonale Antikörper liegen im Bereich von 1:500 bis 1:2000.

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