eEF2-Kaninchen-mAb – P13639

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von eEF2

• Katalysiert den GTP-abhängigen ribosomalen Translokationsschritt während der Translationselongation. Während dieses Schritts wechselt das Ribosom vom prätranslokationalen (PRE-) in den posttranslokationalen (POST-)Zustand, während sich die neu gebildete, an die A-Stelle gebundene Peptidyl-tRNA und die an die P-Stelle gebundene deacylierte tRNA jeweils zur P- und E-Stelle bewegen, begleitet von einer Bewegung der mRNA und Konformationsänderungen im Ribosom. Zugehörige Referenz: PMID:26593721
• eEF2 ist ein hochkonserviertes 95-kDa-GTP-bindendes Protein aus der Familie der Elongationsfaktoren G und für die Proteinbiosynthese essenziell.
• Es ist hauptsächlich im Zytoplasma lokalisiert, wo es seine kanonische Funktion ausübt, wird jedoch auch im Zellkern nachgewiesen, was auf zusätzliche, nicht-translational vermittelte Funktionen hindeutet.
• Posttranslationale Modifikationen, darunter Phosphorylierung, Acetylierung, ADP-Ribosylierung, Methylierung und Ubiquitin-ähnliche Konjugation, regulieren die Aktivität und Stabilität von eEF2 als Reaktion auf zelluläre Signale.
• Mutationen im EEF2-Gen verursachen die spinocerebelläre Ataxie Typ 26 (SCA26), eine neurodegenerative Erkrankung, die durch fortschreitende motorische Koordinationsstörungen gekennzeichnet ist.
• Strukturelle Untersuchungen zeigen konservierte Nukleotidbindungsdomänen und dynamische Konformationen, die für die Ribosomenbindung und Translokation entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen richtet sich gegen die C-terminale Region (AS 759–858), was den Nachweis von vollständig exprimiertem eEF2 und potenziellen Spaltprodukten erleichtern kann. Überprüfen Sie die Bandengröße in repräsentativen Lysaten bei etwa 95 kDa.
• Für den Western-Blot sollte ein Standard-SDS-PAGE-Gel (z. B. 8–10 %) sowie eine PVDF- oder Nitrozellulosemembran verwendet werden. Erwägen Sie die Optimierung der Blockierungsbedingungen (z. B. 5 % Magermilchpulver oder BSA), um den Hintergrund zu reduzieren.
• Bei IHC-P und IF/ICC können eine Antigen-Retrieval-Behandlung (Citrat- oder EDTA-Puffer) und eine Permeabilisierung erforderlich sein. Testen Sie die Fixierungsprotokolle (Formalin im Vergleich zu Methanol), um ein ausgewogenes Verhältnis zwischen Morphologieerhalt und Epitopzugänglichkeit zu erzielen.
• Die ELISA-Leistung hängt vom Assay-Format ab. Als monoklonaler Antikörper kann er als Nachweis- oder Capture-Reagenz dienen. Validieren Sie Linearität und Sensitivität unter Verwendung von rekombinantem eEF2 oder Zelllysaten.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ermöglicht translationale Forschung in gängigen Modellorganismen. Bestätigen Sie die Spezifität durch siRNA-Knockdown- oder Knockout-Kontrollen in Ihrem experimentellen System.

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