EED Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF, IP, ELISA - O75530

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EED-Funktion und Lokalisierung

• Polycomb-Protein EED (Embryonic ectoderm development protein), auch als HEED, COGIS und WAIT-1 bezeichnet, ist eine Kernkomponente des Polycomb-repressiven Komplexes 2 (PRC2). Alternatives Spleißen und alternative Initiation ergeben mehrere Isoformen.
• Als Teil des PRC2/EED-EZH2-Komplexes methyliert EED Histon H3 an Lysin-9 und Lysin-27, was zur transkriptionellen Stilllegung von Zielgenen wie HOXC8, HOXA9, MYT1 und CDKN2A führt.
• EED erkennt trimethyliertes Histon H1 an Lysin-26 (H1K26me3), was die PRC2-Methyltransferase-Aktivität an nukleosomalem H3K27 hemmt, während die Erkennung von H3K27me3 die repressive Markierung weiterverbreitet.
• Der PRC2/EED-EZH2-Komplex kann auch DNA-Methyltransferasen rekrutieren und so eine funktionelle Verbindung zwischen Histonmodifikation und DNA-Methylierung für eine stabile Genrepression herstellen.
• EED ist im Zellkern lokalisiert und assoziiert mit Chromosomen, was zu seiner Rolle in der Chromatinregulation passt.
• Es unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung und Methylierung, die seine Aktivität und Interaktionen modulieren können.
• EED wird in humanen Geweben weit verbreitet exprimiert, mit bemerkenswert erhöhten Spiegeln in Brust- und Darmkrebs, was seine Beteiligung an der Onkogenese unterstützt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die N-terminalen 400 Aminosäuren von humanem EED; diese Region kann das Voll-Länge-Protein und bestimmte Isoformen detektieren. Validieren Sie die Detektion spezifischer Spleißvarianten in Ihrem experimentellen System.
• Für Western Blotting (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 50 kDa. Bestätigen Sie die Bandengröße mit geeigneten positiven und negativen Kontrollen.
• Kreuzreaktivität wird für Human, Maus und Ratte berichtet. Überprüfen Sie bei Bedarf die Reaktivität mit anderen Spezies durch Sequenzabgleich des Immunogens.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC führen Sie eine Standardfixierung (z.B. 4% PFA) und Permeabilisierung (z.B. 0,1% Triton X-100) durch. Eine Kernfärbung ist zu erwarten.
• Für die Immunpräzipitation (IP) verwenden Sie Protein A- oder G-Beads und optimieren Sie das Antikörper-zu-Lysat-Verhältnis. Klären Sie Lysate vor, um den Hintergrund zu reduzieren.
• ELISA-Eignung ist angegeben; titrieren Sie den Antikörper und verwenden Sie rekombinantes EED-Protein oder Peptid als Beschichtungsantigen.
• Angesichts der EED-Überexpression in bestimmten Krebsarten sollten relevante Krebszelllinien (z.B. Brust, Darm) als positive Kontrollen eingeschlossen werden.

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