DNMT1 Kaninchen pAb für WB, IF/ICC, IP, ELISA – P26358

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von DNMT1

• DNMT1 (DNA (Cytosin-5)-Methyltransferase 1) ist die wichtigste Erhaltungsmethyltransferase, die DNA-Methylierungsmuster während der DNA-Replikation auf den neu synthetisierten Strang überträgt und so die epigenetische Vererbung sicherstellt (PubMed:17200670, PubMed:21745816). Zugehörige Referenzen: PMID:17200670, PMID:21745816

• DNMT1 methyliert bevorzugt hemimethylierte CpG-Dinukleotide und ist essenziell für die zuverlässige Weitergabe von Methylierungsmustern während der Zellteilung (PubMed:21745816, PubMed:26070743). Zugehörige Referenzen: PMID:21745816, PMID:26070743

• Über die replikationsgekoppelte Erhaltung hinaus bindet DNMT1 während der G2- und M-Phase an Chromatin, um die DNA-Methylierung unabhängig von der Replikation aufrechtzuerhalten (PubMed:21745816). Zugehörige Referenzen: PMID:21745816

• DNMT1 vermittelt transkriptionelle Repression direkt durch Interaktion mit HDAC2 und koordiniert DNA-Methylierung mit Histonmodifikationen (PubMed:10888872, PubMed:16357870). Zugehörige Referenzen: PMID:10888872, PMID:16357870

• In kolorektalen Krebszellen bildet DNMT1 einen Corepressor-Komplex, der die onkogene KRAS-getriebene Promotor-Hypermethylierung und die Stummschaltung von Tumorsuppressorgenen vermittelt (PubMed:24623306). Es erhält außerdem einen transkriptionell repressiven Zustand von Genen in undifferenzierten embryonalen Stammzellen aufrecht (PubMed:24623306). Zugehörige Referenzen: PMID:24623306

• DNMT1 ist ubiquitär exprimiert, mit den höchsten Gehalten in fötalen Geweben, Herz, Niere, Plazenta und peripheren Blutmonozyten, und niedrigeren Gehalten in Milz, Lunge, Gehirn, Dünndarm, Kolon, Leber und Skelettmuskel. Isoform 2 ist weniger häufig als Isoform 1.

• DNMT1 enthält eine Zinkfingerdomäne vom CXXC-Typ und unterliegt regulatorischen posttranslationalen Modifikationen wie Acetylierung, Phosphorylierung und Methylierung.

• DNMT1 lokalisiert im Zellkern und bindet an Chromosomen, was mit seiner Rolle bei der Erhaltungsmethylierung und transkriptionellen Regulation übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen deckt die C-terminale Region (AS 760–1109) von humanem DNMT1 ab, die die katalytische Methyltransferasedomäne umfasst; dieses Design zielt auf das aktive Zentrum ab und kann die Detektion von vollem DNMT1 verbessern.
• Für Western Blot erwarten Sie eine Bande bei etwa 183 kDa; die Verwendung eines SDS-PAGE-Gels mit niedrigem Prozentanteil (z. B. 6–8 %) und verlängerten Transferzeiten kann bei der Auflösung dieses hochmolekularen Proteins helfen.
• Die Expressionslevel von DNMT1 variieren zwischen Zelltypen und Geweben; validieren Sie die Antikörperleistung in Ihrem spezifischen Probesystem mit geeigneten Positiv- (z. B. HeLa, HEK293) und Negativkontrollen.
• Für Immunpräzipitation optimieren Sie die Antikörperkonzentration und erwägen Sie eine Quervernetzung an Perlen, um die Interferenz durch die schwere Kette von IgG bei ~50 kDa zu reduzieren.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC ist eine nukleäre Permeabilisierung (z. B. mit Triton X-100) und geeignete Fixierung erforderlich, um Zugang zum nukleären Antigen zu erhalten; eine Co-Färbung mit einem Kernmarker kann die Lokalisation bestätigen.

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