DiMethyl-Histon H3-K79 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper (Q16695/P68431) – Validiert für WB, IHC-P, ChIP-seq

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

• Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, unverzichtbar für die Verpackung und Kompaktierung von DNA zu Chromatin. Diese strukturelle Organisation reguliert die Zugänglichkeit von DNA und spielt eine zentrale Rolle bei Transkription, DNA-Reparatur, Replikation und chromosomaler Stabilität. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Histon H3 existiert in mehreren Varianten. Das kanonische Histon H3.1 (kodiert von Genen wie H3C1–H3C12) wird ubiquitär exprimiert, während die testisspezifische Variante H3.1t (H3-4) hauptsächlich in Hodenzellen exprimiert wird. Beide weisen eine hohe Sequenzähnlichkeit auf, einschließlich der konservierten K79-Reste. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695 (Gewebespezifität), UniProt P68431

• Posttranslationale Modifikationen (PTM) an Histon H3, wie Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und andere, bilden den sogenannten "Histon-Code", der die Chromatindynamik steuert. Lysin 79 (K79) ist eine bekannte Stelle für Methylierung (Mono-, Di- und Trimethylierung), wobei die Dimethylierung (H3K79me2) an der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur und Telomersilenzierung beteiligt ist. Verwandte Referenzen: Für verwandte Modifikationen siehe PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid mit dimethyliertem K79 gewonnen. Er wurde entwickelt, um spezifisch den Dimethylierungszustand von Histon H3 an K79 nachzuweisen. Aufgrund der Sequenzkonservierung wird eine breite Reaktivität über viele Spezies hinweg vorausgesagt. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Subzelluläre Lokalisierung: Histon H3 befindet sich hauptsächlich im Zellkern und auf Chromosomen, wo es Teil des Nukleosomenkerns bildet. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Immunogendesign: Der Antikörper wurde unter Verwendung eines synthetischen Peptids mit dimethyliertem K79 des menschlichen Histons H3 (NP_003520.1) hergestellt. Für ähnliche modifikationsspezifische Antikörper empfehlen sich synthetische Peptide mit definierten Modifikationen, um eine hohe Spezifität zu gewährleisten.
• Western Blotting (WB): Histon H3 hat ein vorausgesagtes Molekulargewicht von ~15 kDa. Für beste Ergebnisse verwenden Sie säureextrahierte Histone oder Ganzzelllysate und optimieren Sie Gelprozentsatz und Transferbedingungen für niedermolekulare Proteine. Validieren Sie die Reaktion in Ihrem Probensystem.
• Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC): Gegebenenfalls ist eine Antigen-Retrieval (z. B. Citratpuffer) erforderlich. Testen Sie einen Bereich von Antikörperverdünnungen; beachten Sie, dass Gewebefixierung und Einbettung die Epitopzugänglichkeit beeinflussen können.
• Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP/ChIP-seq): Dieser Antikörper ist für ChIP- und ChIP-seq-Anwendungen zugelassen. Stellen Sie sicher, dass eine ordnungsgemäße Quervernetzung (z. B. mit Formaldehyd) und Chromatinschneidung zu Fragmenten von ~200–500 bp erfolgt. Fügen Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen für den Methylierungsstatus hinzu.
• ELISA und IP: Standardprotokolle sind anwendbar. Für die IP können Vorreinigung (Pre-clearing) und die Verwendung geeigneter Lysepuffer (z. B. RIPA für Histonextraktion) das Signal-Rausch-Verhältnis verbessern.
• Kreuzreaktivität: Der Antikörper erkennt humanes, murines und Ratten-Histon H3, basierend auf Sequenzhomologie wird eine breite Kreuzreaktivität mit weiteren Spezies vorausgesagt. Überprüfen Sie die Kreuzreaktivität immer bei Ihrer Zielspezies.
• Allgemein: Wie bei jedem polyklonalen Antikörper sollten Sie Chargenvariabilität berücksichtigen und beim Wechsel der Charge eine erneute Validierung durchführen. Lagern Sie den Antikörper wie empfohlen (Versand mit Eisbeutel) und vermeiden Sie mehrere Gefrier-Auftau-Zyklen.

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