DiMethyl-Histon H3-K4 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, ChIP, ChIP-seq, IHC-P

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H3.1t/Histon H3.1 Funktion und Lokalisierung

Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, der grundlegenden repetitiven Einheit des Chromatins. Zusammen mit den Histonen H2A, H2B und H4 bildet es ein Oktamer, um das 147 Basenpaare DNA gewickelt sind, wodurch das Genom kompaktiert und die DNA-Zugänglichkeit reguliert wird. Diese Struktur ist essentiell für DNA-templatierte Prozesse einschließlich Transkription, Replikation, Reparatur und chromosomale Stabilität.

Die kanonische Histon-H3.1-Variante wird durch mehrere Gene kodiert (z.B. HIST1H3A bis HIST1H3J) und wird während der S-Phase auf neu replizierte DNA abgelagert. Im Gegensatz dazu ist die H3.1t-Isoform (Gen H3-4 / HIST3H3) eine testisspezifische Variante, die hauptsächlich in Hodenzellen exprimiert wird und möglicherweise an Chromatin-Remodellierung während der Spermatogenese beteiligt ist.

Histon H3 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen (PTMs) an seinem flexiblen N-terminalen Schwanz, die einen komplexen regulatorischen "Histon-Code" bilden. Bekannte PTMs umfassen Methylierung, Acetylierung, Phosphorylierung, ADP-Ribosylierung, Ubiquitinierung und andere. Die Methylierung von Lysin 4 (H3K4) ist eine Schlüsselmarkierung: Dimethylierung (H3K4me2) ist mit aktiven und vorbereiteten genre regulatorischen Elementen wie Promotoren und Enhancern assoziiert.

Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid hergestellt, das dem N-terminalen Schwanz (Aminosäuren 1-100) von menschlichem Histon H3 entspricht, einer Region, die das K4-Rest enthält und über Spezies hinweg hochkonserviert ist. Der Antikörper erkennt spezifisch die dimethylierten Form von K4.

Histon H3 ist im Zellkern lokalisiert und ist eine strukturelle Komponente der Chromosomen.

Verwandte Referenzen: PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst den N-terminalen Schwanz von Histon H3, was die Erkennung der Region, die das K4-Rest enthält, sicherstellt. Für methylierungsspezifischen Nachweis, validieren Sie mit geeigneten Peptid-Blockierungsassays oder Mutanten-Histon-Kontrollen.
• Für Western Blotting (WB) können Histon-angereicherte Extrakte oder Gesamtzelllysate verwendet werden. Das erwartete Band liegt bei etwa 15 kDa. Erwägen Sie die Verwendung einer hochwertigen Transfermembran und verlängerte Blockierung, um den Hintergrund zu minimieren.
• Bei Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) und ChIP-seq kann dieser Antikörper für die Kartierung der H3K4me2-Verteilung geeignet sein. Schließen Sie positive Kontroll-Loci (z.B. aktive Promotoren) und negative Kontroll-Loci (z.B. intergene Regionen) ein, um die Spezifität zu bewerten. Bei der Durchführung von ChIP-seq sollten Bibliotheksvorbereitung und Sequenziertiefe gemäß dem spezifischen Versuchsdesign optimiert werden.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) können Antigen-Retrieval (z.B. hitzevermitteltes Citratpuffer pH 6.0) und Permeabilisierung die Detektion verbessern. Testen Sie verschiedene Fixierungsmethoden (z.B. Formalin vs. Methanol), da diese die Verfügbarkeit des Epitops beeinflussen können.
• Der Antikörper zeigt aufgrund der hohen Sequenzkonservierung des H3-N-Terminus vorhergesagte Kreuzreaktivität mit Mensch, Maus, Ratte und anderen Spezies. Wenn Sie eine neue Spezies verwenden, erwägen Sie eine Sequenzalignment, um die Epitop-Konservierung zu bestätigen, und führen Sie ein positives Kontrollexperiment durch.
• Methylierungsspezifische Antikörper können Kreuzreaktivität mit anderen Methyl-Lysin-Markierungen zeigen. Um die Spezifität zu bestätigen, schließen Sie kompetitive Peptid-Blockierungsexperimente unter Verwendung von Dimethyl-K4 und anderen modifizierten Peptiden ein.
• Optimale Verdünnungen sollten empirisch für jeden Assay bestimmt werden.

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