DiMethyl-Histon H3-K36 (Q16695 / P68431) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ChIP-seq

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

• Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, die DNA wickelt und zu Chromatin verdichtet. Dies begrenzt die Zugänglichkeit der DNA für zelluläre Maschinen und spielt damit eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Die DNA-Zugänglichkeit wird über einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen, kollektiv als Histon-Code bekannt, und die Nukleosom-Umbau reguliert.
• Das kanonische Histon H3.1 (UniProt P68431) wird von mehreren replikationsabhängigen Genen kodiert (H3C1, H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12). Die Variante H3.1t (UniProt Q16695, Gen H3-4), auch bekannt als H3t oder H3/g, wird in testikulären Zellen exprimiert.
• Die Dimethylierung von Lys36 (herkömmliche Nummerierung; entspricht Lys37 in der Vorläufersequenz) ist eine spezifische posttranslationale Modifikation am N-terminalen Ende von Histon H3. Diese Modifikation trägt zum Histon-Code bei und ist an die transkriptionelle Elongation und die Aufrechterhaltung der Genomintegrität gebunden. Verwandte Referenzen:
  • PMID:15983376
  • PMID:16185088
  • PMID:16267050
  • PMID:16627869
  • PMID:17194708
• Sowohl Histon H3.1 als auch H3.1t lokalisieren im Kern und im Chromosom, was konsistent mit ihrer Rolle in der Chromatinstruktur und -funktion ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen war ein synthetisches Peptid, das dimethyliertes Lys36 von humanem Histon H3 enthält und darauf ausgelegt ist, eine hohe Spezifität für diese Modifikation zu verleihen. Für kritische Anwendungen sollten Sie die Spezifität durch Peptid-Wettbewerbsassays oder Western-Blot-Analysen von Histon-Extrakten mit bekanntem Methylierungszustand verifizieren.
• Im Western Blot (WB) wird eine Bande bei ca. 15 kDa erwartet. Optimieren Sie die Antikörperverdünnung und validieren Sie im relevanten Probensystem unter Verwendung geeigneter Ladungskontrollen.
• Für die Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP und ChIP-seq) bestätigen Sie die Anreicherung von dimethyl-H3K36 an aktiv transkribierten Genkörpern oder anderen etablierten genomischen Zielen. Fügen Sie geeignete positive und negative Kontrollloci ein, um eine ChIP-taugliche Leistung sicherzustellen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) und der Immunfluoreszenz (IF/ICC) können Fixierungs- und Antigen-Retrieval-Methoden die Epitop-Zugänglichkeit beeinflussen; testen Sie verschiedene Bedingungen, um ein optimales Signal zu erzielen.

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