DiMethyl-Histon H3-K27 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper (Q16695/P68431) für epigenetische Forschung & ChIP

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, der Grundeinheit des Chromatins. Nukleosomen wickeln und kompaktieren DNA, wodurch der Zugang für zelluläre Maschinen eingeschränkt wird und sie eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität spielen.

Histon H3 unterliegt einer Vielzahl von posttranslationalen Modifikationen (PTMs), darunter Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und viele andere, die gemeinsam als "Histon-Code" bezeichnet werden. Diese Modifikationen regulieren die Chromatinstruktur und Genexpression dynamisch. Der N-terminale Schwanz von Histon H3 ist besonders reich an modifizierbaren Resten, wobei Lysin 27 (K27) eine kritische Stelle für Methylierungsereignisse ist. Die Di-Methylierung von H3K27 (H3K27me2) wird mit transkriptioneller Repression und der Erhaltung von Heterochromatin in Verbindung gebracht.

Das menschliche Genom kodiert für mehrere Histon-H3-Varianten. Q16695 (H3-4, auch bekannt als H3.1t) ist ein testisspezifisches Histon, das hauptsächlich in Hoden exprimiert wird, während P68431 (H3C1/H3C2/H3C3/H3C4/H3C6/H3C7/H3C8/H3C10/H3C11/H3C12) die kanonischen replikationsabhängigen H3.1-Varianten darstellt, die in somatischen Zellen exprimiert werden. Beide Varianten sind hoch konserviert und teilen identische N-terminale Sequenzen, in denen K27 lokalisiert ist. Sie befinden sich ausschließlich im Kern und auf Chromosomen, wo sie einen integralen Bestandteil der Chromatinfasern bilden.

Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Für den Western Blot (WB) ist eine einzelne Bande um 15 kDa zu erwarten, die Histon H3 entspricht. Verwenden Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen, um die Identität der Bande und die Spezifität für Di-Methylierung zu bestätigen.
• Optimieren Sie für ChIP und ChIP-seq die Bedingungen für Quervernetzung (z. B. Formaldehyd) und Chromatin-Scherung. Erwägen Sie die Validierung der Anreicherung bekannter H3K27me2-Zielorte mittels qPCR oder paralleler Sequenzierung.
• Der Antikörper kreagiert mit menschlichem, Maus- und Rattenmaterial und es wird eine breite Reaktivität vorausgesagt. Dennoch empfiehlt es sich, die Leistung vor großen Experimenten für die spezifische Art und das untersuchte Gewebe zu validieren.
• Für ELISA und Dot Blot (DB) titrieren Sie den Antikörper und fügen Sie Blockierungsschritte hinzu, um unspezifische Bindung zu minimieren; das Peptid-Immunogen kann als Positivkontrolle dienen.
• Beachten Sie bei Immunhistochemie (IHC) und Immunfluoreszenz (IF/ICC), dass Histon H3 nukleär lokalisiert ist; eine Gegenfärbung (z. B. DAPI) kann helfen, die nukleäre Lokalisation sichtbar zu machen. Eine Antigen-Retrieval kann erforderlich sein.

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