DiMethyl-Histone H3-K14 Kaninchen pAb (Q16695/P68431) für WB, IF/ICC, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, der fundamentalen Wiederholungseinheit des Chromatins. Nukleosomen wickeln und komprimieren DNA und begrenzen so die Zugänglichkeit der DNA für zelluläre Maschinerien, die DNA als Vorlage benötigen. Histone spielen eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomaler Stabilität. Die DNA-Zugänglichkeit wird über einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (der „Histon-Code“) und Nukleosom-Remodelling reguliert.

Dieser Antikörper erkennt die dimethylierte Form von Lysin 14 (K14) auf humanem Histon H3. Zwei Hauptisoformen werden durch die SWISS-Accessions Q16695 (Histon H3.1t, exprimiert in testikulären Zellen) und P68431 (Histon H3.1, eine kanonische Variante) dargestellt. Beide Isoformen lokalisieren im Kern und auf den Chromosomen.

Lysin 14 ist eine kritische Aminosäure innerhalb des N-terminalen Schwanzes von Histon H3, die dynamischen posttranslationalen Modifikationen unterliegt, einschließlich Acetylierung und Methylierung, welche die Chromatinstruktur und die Genexpression beeinflussen. Die Dimethylierung von K14 ist mit spezifischen transcriptionellen Ergebnissen verbunden und Teil des breiteren epigenetischen Regulationslandschafts.

Verwandte:Referenzen: Die Kernfunktion des Nukleosoms wird durch zahlreiche strukturelle und biochemische Studien gestützt. Für modifikationsspezifische Einblicke siehe: PMID:19608861, PMID:17194708.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches, dimethyliertes Peptid um K14. Um die Dimethyl-Spezifität sicherzustellen, sollten Sie den Antikörper gegen das nicht-modifizierte K14-Peptid oder Peptide mit Mono-/Trimethylierung bei K14 validieren.
• Für Western Blots kann eine Startverdünnung unter Verwendung von Kernextrakt-Fraktionen optimiert werden; die erwartete Bande liegt bei ~15 kDa. Bestätigen Sie das Verschwinden der Bande in Proben, die mit K14-Demethylase behandelt wurden, falls verfügbar.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) können Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen die Epitop-Zugänglichkeit beeinträchtigen. Es ist ratsam, Methanol- gegen Formaldehyd-Fixierung zu testen und eine Peptid-Wettbewerbskontrolle einzubeziehen.
• Für ELISA verwenden Sie das Immunogen-Peptid als Positivkontrolle und ein unmodifiziertes K14-Peptid als Negativkontrolle, um die modifikationsspezifische Bindung zu verifizieren.
• Der Antikörper wird aufgrund der Sequenzkonservierung des N-terminalen Schwanzes von Histon H3 vorhergesagt, mit einem breiten Spektrum von Arten zu kreuzreagieren. Validieren Sie dies in der Spezies von Interesse unter Verwendung geeigneter positiver und negativer Kontrollen.

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